Amphotericin-B מתווך תיקון מהדק תיקון: טכניקה אלקטרופיזיולוגית לחקר זרמים יוניים בתאי שלפוחית השתן
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:20 דק׳ • April 30th, 2023
טכניקת מהדק טלאי מחורר מאפשרת מדידות בזמן אמת של זרמים יוניים הקשורים לפעילות תעלות יונים על תאים כמו שריר חלק דטרוסור, או DSM, תאים של שלפוחית השתן.
כדי להתחיל, טען את תרחיף תאי ה-DSM על תא זכוכית ודגירה כדי לאפשר היצמדות לתאים. לאחר מכן, הוסף לתאים המודבקים תמיסה חוץ-תאית המכילה יוני טטרה-אתילאמוניום וצזיום. קטיונים אלה חוסמים תעלות אשלגן על קרום התא ומעכבים את זרמי האשלגן המפריעים.
לאחר מכן, קח פיפטה מהדק תיקון מלוטשת - צינור זכוכית חלול דק המכיל אלקטרודת הקלטה המחוברת למגבר. מלאו את הפיפטה בתמיסה תוך-תאית ומלאו אותה באותה תמיסה אך מכילה אמפוטריצין-B, אנטיביוטיקה מחוררת ממברנה.
כעת, טבלו את קצה הפיפטה בתמיסה החוץ-תאית המכילה תאי DSM. לאחר הגדרת הפוטנציאל והזרם לרמות מתאימות, קדם את קצה הפיפטה לכיוון קרום התא ובמקביל עקוב אחר התנגדות האלקטרודה.
עלייה מהירה בערך ההתנגדות מצביעה על כך שקצה הפיפטה הגיע לקרום התא. כעת, הפעל יניקה עדינה על האלקטרודה כדי ליצור אטימה הדוקה הנקראת ג'יגה-אטם בין קצה הפיפטה לקרום הפלזמה.
לאחר היווצרות האטם, אמפוטריצין מתפזר לאט לתוך הקצה ומחורר את הממברנה, ויוצר נקבוביות יונים. לאחר השגת ניקוב אופטימלי, יונים נעים בין התאים לאלקטרודה, ויוצרים זרמים פרופורציונליים לתפקוד תעלת היונים.
פיפטה של 0.25 עד 1 מיליליטר של תרחיף תאים על תא עם תחתית זכוכית היושבת על
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים