מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

החדרה תוך שלפוחית מקלה על העברת תאים סרטניים לשלפוחית השתן של בעל חיים מקבל. כדי להתחיל, הכינו עכבר מורדם במצב שכיבה על כרית חימום כדי לווסת את טמפרטורת גופו. רוקנו את שלפוחית השתן מהשתן.

לאחר מכן, הרכיבו קטטר המחובר למזרק המכיל תמיסת פולי-L-ליזין או PLL. יש לשמן את קצה הקטטר כדי להבטיח החדרה חלקה של השופכה ולקבל גישה לשלפוחית השתן. לאחר ההחדרה, יש להזריק לאט את תמיסת ה-PLL לשלפוחית השתן.

אספקה איטית של PLL מונעת ריפלוקס שלפוחית השתן - זרימה חוזרת של שתן משלפוחית השתן לשופכנים ולכליות. הנח פקק על הקטטר כדי למנוע זרימה מוקדמת. מולקולות ה-PLL המוזרקות בעלות מטען חיובי מקיימות אינטראקציה ונצמדות לציפוי הגליקוזאמינוגליקן הטעון שלילית על הדופן הפנימית של שלפוחית השתן.

הסר את הקטטר ופנה את שלפוחית השתן מתמיסת PLL ושתן. בעזרת מכלול צנתר-מזרק נוסף, הזריק לאט תרחיף תאים סרטניים מקורר לשלפוחית השתן כדי למנוע רפלוקס שלפוחית השתן והשתלת תאים בכליות. תקן את הפקק על הקטטר.

מטען פני השטח המשתנה של שכבת הגליקוזאמינוגליקן משפר את האינטראקציה האלקטרוסטטית שלה עם תאים סרטניים, ומקל על הידבקותם. הסר את הקטטר ופנה את שלפוחית השתן מתאי סרטן ושתן לא דבוקים. עם הזמן, תאי הסרטן המושתלים בתוך שלפוחית השתן מתרבים כדי ליצור גידולים ראשוניים.

לאחר שעכברה מורדמת, ספקו לחות על ידי הזרקה תוך-צפקית של תמיסת הרטמן ב-0.1 מיליליטר לכל 10 גרם משקל גוף. חזור על פעולה זו כל שעה או שעתיים במהלך ההרדמה.

לאחר מכן, מרחו משחת עיניים סטרילית על שתי העיניים. יש למרוח שוב לפי הצורך. לאחר מכן, הניחו את העכבר על מגבות נייר מעל כרית חום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. לאחר מכן, אבטח את הרגליים האחוריות בעזרת סרט. כעת, הפעל לחץ עדין על אזור הבטן התחתונה ואסוף שתן לתוך צינור של 1.5 מיליליטר.

לאחר מכן, טען מזרק של 1 מיליליטר עם PLL סטרילי והצמד קטטר IV בגודל 24 כשסגנון המחט הוסר. מרחו חומר סיכה על קצה הקטטר. לאחר מכן, הכנס את הקטטר לשופכה ובעזרת מלקחיים הנח אותו לשלפוחית השתן. עצור כאשר מורגשת התנגדות. לאחר מכן, יש להוציא לאט 50 מיקרוליטר של PLL בקצב של 10 מיקרוליטר כל 20 שניות כדי למנוע רפלוקס שלפוחית.

כעת, השאירו את הקטטר בשלפוחית השתן למשך 20 דקות עם פקק כדי למנוע יציאה. לאחר 20 דקות, הסר את הקטטר ופנה את שלפוחית השתן מכל תוכן על ידי לחיצה עדינה על הבטן התחתונה. לאחר מכן, בעזרת מזרק של 1 מיליליטר, שטפו את כל התכולה שנותרה מהקטטר.

כעת, ערבבו היטב את תאי ה-MB49-PSA על ידי פיפטינג וטענו אותם למזרק של 1 מיליליטר. חבר את הקטטר ושמן אותו כמו קודם. יש להכניס את הקטטר לשלפוחית השתן כמקודם ולהתחיל בהזרקת התאים באמצעות פליטה הדרגתית של 10 מיקרוליטר ל-20 שניות. לאחר מכן, המתן שעה.

לאחר שעה, הסר את הקטטר ופנה את שלפוחית השתן מכל תכולה. לאחר מכן, שחרר את העכבר. מקם אותו על צד הגחון שלו והחייה אותו עם זריקת אטיפמזול. כעת, עקוב אחר העכבר עד שיחזור לשכיבה על החזה ולאחר מכן החזר אותו לכלוב הביתי שלו.