הכנת בלוקים ספרואידים סרטניים על ידי הקפאת בזק: הליך לשימור ספרואידים סרטניים בגושי מטריצה קפואים

ספרואידים סרטניים הם אגרגטים תאיים תלת מימדיים של תאי גידול. ניתן להטמיע את הספרואידים הללו במטריצת הקולגן, וכתוצאה מכך להיווצרות בלוקים ספרואידים. כדי להקפיא במהירות בלוק ספרואיד, התחל בהנחת בלוק ספרואיד ג'ל קולגן במרכז תבנית היסטולוגית.

שוטפים את הבלוק עם חיץ מתאים ומשלימים את התבנית בתמיסה מקבעת. דגירה כדי לאפשר לתמיסה זו לחדור לספרואידים ולקשר בין החלבונים התאיים. שלב זה מסייע בשמירה על המבנה הכדורי עבור ההליך הבא. לאחר מכן, שאפו את הפתרון המקובע.

מניחים את גוש הג'ל הספרואיד לתבנית היסטולוגיה טרייה המכילה שכבה דקה של מדיום הטבעה. כסה אותו במדיום הטמעה נוסף כדי להטביע לחלוטין את גוש הכדור. לבסוף, טבלו את התבנית באמבט חנקן נוזלי למשך זמן קצר.

הקפאה מהירה מונעת היווצרות של גבישי קרח גדולים יותר בתוך ספרואידים. זה עוזר בשמירה על שלמות הכדור מבלי לגרום נזק מכני. לאחר שהשכבה הבינונית המוטמעת מתמצקת סביב גוש הכדורים, הסר את הגוש הקפוא מהתבנית. אחסן את גוש הספרואיד הקפוא בטמפרטורות נמוכות להמשך ניתוח היסטולוגי.

ראשית, השתמש במלקחיים קטנים כדי להרים את גוש ג'ל הקולגן והספרואידים מהחלקה החדרית. לאחר מכן, הניחו את גוש ג'ל הקולגן בתבנית היסטולוגיה מפלסטיק. שטפו את גוש ג'ל הקולגן עם 1X PBS לזמן קצר וקבעו אותו עם 4% PFA ב-PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שטפו את גוש ג'ל הקולגן עם 1.5 מיליליטר של 1X PBS על שייקר למשך 15 דקות.

מרחו שכבה דקה של תרכובת OCT על תחתית תבנית היסטולוגיה פלסטית חדשה. לאחר מכן, הניחו את בלוק ג'ל הקולגן הקבוע והשטוף על גבי תרכובת ה-OCT לפני מילוי זהיר של שאר התבנית בתרכובת OCT. שמור את התבנית על 4 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר מכן, הקפיאו את התבנית על צלחת פטרי בגודל 100 מילימטר שצפה על חנקן נוזלי, ואחסנו את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס.