העברת פלסמידים של DNA לתוך אורותל של שלפוחית השתן של עכבר: הליך מבוסס אלקטרופורציה כדי להעביר ביעילות פלסמידים DNA לתוך תאי השתן של שלפוחית השתן כדי ליצור מודלים מהונדסים גנטית

כדי להתחיל, הכינו עכברה מורדמת במצב שכיבה. ודא ששלפוחית השתן שלו ריקה לחלוטין. דרך פתח השופכה, הכנס קטטר משומן. סיכה מסייעת במעבר חלק של השופכה לכניסה לשלפוחית השתן.

לאחר הצנתור, יש לבצע חתך בבטן ולנתח את השרירים הפנימיים כדי לחשוף את שלפוחית השתן. לאחר מכן, פיפטה תרחיף של פלסמידים DNA מעורבב עם צבע מתאים לקצה החיצוני של הצנתר. פלסמידים אלה של DNA מקודדים לגן מדווח פלואורסצנטי.

חבר מזרק לצנתר ודחף אותו כדי להעביר את תמיסת הפלסמיד לשלפוחית השתן. מולקולות הצבע המוזרקות צובעות את שלפוחית השתן, ומאשרות את המתן המוצלח של תמיסת פלסמיד. הסר את מכלול הצנתר והדק את פתח השופכה החיצוני כדי למנוע את זרימת תמיסת הפלסמיד החוצה.

כעת, צבטו את שלפוחית השתן באמצעות שתי אלקטרודות המחוברות למחולל אלקטרופורציה. הפעל פולסים חשמליים של מתח מתאים לתקופה רצויה על שלפוחית השתן. החשיפה של אורותליום שלפוחית השתן, הציפוי הפנימי ביותר של שלפוחית השתן, לשדות החשמליים המופעלים גורמת לנקבוביות זמניות בקרום התא האורותליאלי.

חדירות הממברנה המוגברת מאפשרת אספקה יעילה של פלסמידי ה-DNA המוזרקים לתאים. לאחר אלקטרופורציה, תפר את החתך הניתוחי. אפשר לעכבר להתאושש. התאים האורותליים המועברים עם פלסמידים של ה-DNA מבטאים חלבונים מדווחים פלואורסצנטיים.

כדי שכל שלפוחית השתן תעבור, הכינו לפחות 20 מיקרוליטר של פלסמיד DNA במיקרוגרם