בידוד אקסוזום: טכניקת אולטרה-צנטריפוגה מבוססת צפיפות המשתמשת בכרית סוכרוז כדי להפריד אקסוזומים ממדיה מותנית של תאים בתרבית

אקסוזומים - שלפוחיות בגודל ננו, קשורות לממברנה הנושאות ביומולקולות פונקציונליות - מופרשות באופן פעיל על ידי רוב סוגי התאים וניתן לבודד אותן מסופרנטנטים של תרבית תאים במבחנה. כדי לבודד אקסוזומים, ראשית, קצרו את החומר העל-טבעי או החומר המותנה מתרבית תאים מעניינת. המדיה המותנית תכיל אקסוזומים, חלבונים, פסולת תאית ושלפוחית.

צנטריפוגה של המדיה כדי לגלול את הפסולת התאית. אספו את הסופרנטנט המכיל אקסוזום וסננו אותו דרך מסננות תאים כדי להסיר את השלפוחיות הגדולות יותר. העבר נפח ספציפי של המדיה המסוננת לצינור טרי. לאחר מכן, מערבבים ריכוזים מתאימים של סוכרוז ותחמוצת דאוטריום להכנת כרית סוכרוז - שיפוע לא רציף של סוכרוז.

הוסף נפח ספציפי של תמיסת כרית הסוכרוז לתוך הצינור המכיל מדיה; התמיסה יוצרת שכבה נפרדת בתחתית. כעת, צנטריפוגה את הצינור במהירות גבוהה. כרית הסוכרוז מקלה על נדידת האקסוזומים מהמדיה לתמיסת הסוכרוז תוך שמירה על שלמות האקסוזום. מזהמי החלבון בצפיפות גבוהה תופסים את הממשק בין תמיסת הסוכרוז למדיה.

העבירו בזהירות את החלק העיקרי של שכבת הסוכרוז המכילה אקסוזום לתוך צינור טרי עם מאגר מתאים. צנטריפוגה במהירות גבוהה להשגת כדור של אקסוזומים מטוהרים. השליכו את הסופרנטנט המכיל סוכרוז יחד עם כל מזהמי החלבון. השעו מחדש את גלולת האקסוזום במאגר ואחסנו בטמפרטורות נמוכות עד לשימוש נוסף.

כדי לנקות מראש