$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
אקסוזומים - שלפוחיות בגודל ננו, קשורות לממברנה הנושאות ביומולקולות פונקציונליות - מופרשות באופן פעיל על ידי רוב סוגי התאים וניתן לבודד אותן מסופרנטנטים של תרבית תאים במבחנה. כדי לבודד אקסוזומים, ראשית, קצרו את החומר העל-טבעי או החומר המותנה מתרבית תאים מעניינת. המדיה המותנית תכיל אקסוזומים, חלבונים, פסולת תאית ושלפוחית.
צנטריפוגה של המדיה כדי לגלול את הפסולת התאית. אספו את הסופרנטנט המכיל אקסוזום וסננו אותו דרך מסננות תאים כדי להסיר את השלפוחיות הגדולות יותר. העבר נפח ספציפי של המדיה המסוננת לצינור טרי. לאחר מכן, מערבבים ריכוזים מתאימים של סוכרוז ותחמוצת דאוטריום להכנת כרית סוכרוז - שיפוע לא רציף של סוכרוז.
הוסף נפח ספציפי של תמיסת כרית הסוכרוז לתוך הצינור המכיל מדיה; התמיסה יוצרת שכבה נפרדת בתחתית. כעת, צנטריפוגה את הצינור במהירות גבוהה. כרית הסוכרוז מקלה על נדידת האקסוזומים מהמדיה לתמיסת הסוכרוז תוך שמירה על שלמות האקסוזום. מזהמי החלבון בצפיפות גבוהה תופסים את הממשק בין תמיסת הסוכרוז למדיה.
העבירו בזהירות את החלק העיקרי של שכבת הסוכרוז המכילה אקסוזום לתוך צינור טרי עם מאגר מתאים. צנטריפוגה במהירות גבוהה להשגת כדור של אקסוזומים מטוהרים. השליכו את הסופרנטנט המכיל סוכרוז יחד עם כל מזהמי החלבון. השעו מחדש את גלולת האקסוזום במאגר ואחסנו בטמפרטורות נמוכות עד לשימוש נוסף.
כדי לנקות מראש את המדיום המותנה שנאסף, צנטריפוגה אותו ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. העבירו את הסופרנטנט לצינור חדש והשליכו את הגלולה. לאחר שחזרתם על שלב הצנטריפוגה הזה עם הסופרנטנט שהתאושש, החזירו את הסופרנטנט שוב והשליכו את הגלולה.
לאחר מכן, צנטריפוגה את הסופרנטנט המשוחזר ב-2,000 x גרם למשך 15 דקות ו-4 מעלות צלזיוס. שמור את הסופרנטנט והשליך את הגלולה. סנן את הסופרנטנט פעם אחת דרך מסנן של 0.22 מיקרומטר המחובר למזרק של 20 מיליליטר לתוך צינור צנטריפוגה טרי.
בינתיים, להכנת תמיסת סוכרוז 25% בתחמוצת דאוטריום, שקלו במדויק 1.9 גרם סוכרוז בצינור אוניברסלי. לאחר מכן, הוסיפו תחמוצת דאוטריום עד שהמשקל מגיע ל-7.6 גרם. לאחר מכן, מלאו צינור אולטרה-צנטריפוגה ב-22.5 מיליליטר של מדיום ממוזג שנוקה מראש.
הניחו פיפטה מזכוכית בצינור. הוסף 3 מיליליטר תמיסת סוכרוז דרך הפיפטה כך שהתמיסה תיצור שכבה נפרדת מתחת למדיום הממוזג. הנח בזהירות את הצינור המכיל תמיסת סוכרוז בינונית מותנית בשכבות לתוך הדלי של רוטור מתנדנד החוצה.
אבטח את הדלי לתוך הרוטור. הכנס את הרוטור לתוך האולטרה-צנטריפוגה וסובב אותו 100,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 1.5 שעות. אוספים 2 מיליליטר משכבת הסוכרוז מהצינור, 1 מיליליטר בכל פעם, בעזרת פיפטה P1000 עם קצהו מחובר לקצה של 10 מיקרוליטר ומוסיפים אותו לבקבוק אולטרה-צנטריפוגה המכיל 20 מיליליטר PBS מסונן לכביסה.
הנח את הצינור לתוך רוטור בעל זווית קבועה וצנטריפוגה אותו ב-100,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 1.5 שעות. השתמש בפיפטה סרולוגית של 10 מיליליטר כדי להסיר בזהירות את הסופרנטנט. השעו מחדש את הגלולה עם 400 מיקרוליטר PBS מסונן.