אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:04 דק׳ • April 30th, 2023
אקסוזומים - שלפוחיות ממברנה בגודל ננו, שמקורן בתאים - מציגים פוטנציאל ככלי אספקה טיפוליים עבור RNA או siRNA מפריע קטן דו-גדילי.
לאחר השחרור לציטופלזמה של תא המטרה, siRNA נקשר לקומפלקס ההשתקה המושרה על ידי RNA. לאחר מכן, הקומפלקס המופעל מזהה ונקשר ל-mRNA ספציפי, מווסת באופן שלילי את ביטויו ומתווך השתקת גנים.
כדי לעטוף את siRNA באקסוזומים, ראשית, יש לקרר קובטה אלקטרופורציה על קרח. לאחר מכן, מערבבים אקסוזומים ו-siRNA ספציפי בשפופרת ביחס הרצוי באמצעות מאגר אלקטרופורציה מתאים. כעת, העבירו את התערובת הזו לקובט המצוננת מראש.
סגור את הקובט והנח אותו במחזיק הקובט של האלקטרופורטור. סובב את הגלגל המסתובב כדי להבטיח שהקובטה יוצרת מגע עם אלקטרודות האלקטרופורציה. כעת, הפעל את תוכנית האלקטרופורציה שנבחרה.
במהלך האלקטרופורציה, הפולסים החשמליים מפריעים לשכבת הפוספוליפידים הדו-שכבתית של האקסוזומים התלויים במאגר המוליך. התוצאה היא היווצרות נקבוביות חולפות בקרום האקסוזום, מה שמקדם את הדיפוזיה של siRNA לתוך השלפוחית. המאגר מסייע במניעת צבירת siRNA.
לאחר השלמת האלקטרופורציה, הנקבוביות נאטמות מחדש, ולוכדות את ה-siRNA בפנים. לבסוף, הוציאו את הקובטה מהאלקטרופורטור והעבירו את התערובת לצינור טרי. אחסן את האקסוזומים העטופים ב-siRNA בטמפרטורות נמוכות עד לשימוש נוסף.
לפני תחילת האלקטרופורציה, יש לקרר מראש את קו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים