בידוד תאי כליות מורין: טכניקה לבודד וליצור תרבית ראשונית של תאי אפיתל צינורית הכליה

0 צפיות3:21 דק' • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לבודד תאי אפיתל צינוריים כלייתיים או TECs, התחל בלקיחת כליית עכבר מבודדת טרייה בצלחת פטרי. מקלפים את קפסולת הכליה - השכבה החיצונית הדקה המקיפה את הכליה - ומסירים את המדולה או את החלק הפנימי ביותר של הכליה, ומשאירים את קליפת המוח המכילה את הצינורית ואת תאי האפיתל הצינוריים.

טוחנים את חלקי הכליה הנותרים לחתיכות קטנות ודוגרים אותם במאגר עיכול חם המכיל את האנזים קולגנאז. קולגנאז מפרק את חלבון הקולגן שמחזיק את רקמות הכליה יחד, ומשחרר את צינוריות הכליה ואת תאי הכליה לתרחיף.

סנן את התרחיף כדי להסיר רקמות כליה לא מעוכלות. לאחר מכן, הוסיפו לסינון אמצעי תרבית מקוררים מראש. הטמפרטורה הנמוכה יותר מנטרלת קולגנאז ועוצרת את עיכול הרקמות הנוסף. צנטריפוגה את המסנן במהירות נמוכה כדי לאפשר לצינורות הצפופים יותר ולתאים הצינוריים להתיישב בעוד סוגי תאים וזיהומים אחרים נשארים תלויים.

הסר את השבר הלא רצוי הזה והוסף מצע תרבית כדי להשעות מחדש את הגלולה. זרעו את התרחיף בכלי תרבית מצופה קולגן ודגרו. התאים הצינוריים החופשיים נצמדים היטב לקולגן בעוד הצינורות נשארים תלויים. תת-תרבות להסרת הצינורות הלא מחוברים וקבלת התרבות הראשונית של תאי אפיתל צינוריים.

כדי לעבד את הכליות שנקטפו, ראשית, הסר את כמוסות הכליה והמדולה. לאחר מכן, טוחנים את שתי הכליות לחתיכות זעירות ומדגרים אותן ב -10 מיליליטר של מאגר עיכול בתנור של 37 מעלות צלזיוס עם סיבוב עדין למשך 5 דקות.

לאחר העיכול, הסר את כל הרקמות הלא מעוכלות על ידי העברת המאגר דרך מסנן של 70 מיקרון. לאחר איסוף הרקמה המעוכלת, הוסף 10 מיליליטר של אמצעי תרבות כדי לעצור את העיכול. לאחר מכן, צנטריפוגה את תרחיף הרקמה המסוננת ב-50 x g למשך 5 דקות כדי לגלול את התאים הצינוריים. לאחר מכן, העבירו את הסופרנטנט לצינור חדש, הוסיפו 5 מיליליטר של מצע תרבית, וחזרו על הצנטריפוגה כדי לאסוף את כל התאים הצינוריים שנותרו.

כעת, השעו מחדש את הגלולה הראשונה ב-20 מיליליטר של אמצעי תרבית וצנטריפוגה ב-50 x גרם למשך 5 דקות כדי לטהר עוד יותר את התאים שנאספו. השלך את הסופרנטנט. לאחר מכן, השעו מחדש את שני הכדורים ב -10 מיליליטר של מדיום תרבית. לאחר מכן, ספרו את התאים החיים באמצעות צביעת Trypan Blue. לאחר מכן, זרעו עד 10 מיליון תאים על צלחת מצופה קולגן בגודל 60 מילימטר ותנו לתאים הצינוריים להיצמד למשך הלילה.

09:00

Microdissection של מקטעי רקמת הכליה העיקרי, התאגדות עם טכנולוגיית הרומן לבנות בפיגומים-חופשית

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:14

דרך יעילה Sieving כדי לבודד Glomeruli ללא פגע מן החולדה למבוגרים כליות

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:18

בידוד ותרבות של נוירונים ראשוניים גליה משלפוחית השתן של חולדה בוגרת

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:06

בידוד והתרבות של תאים מאזור nephrogenic של הכליה עכבר עובריים

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:35

בידוד גלומרולי: טכניקה להשגת גלומרולי שלם מכליה מורין

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:43

Repopulation תאי אפיתל והכנה של מכרסמים תאיים מטריקס פיגומים לפיתוח רקמות כליה

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:30

דיספציה ותרבות של כליה עובריים עכבר

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:40

ניתוח השטף חוץ-תאי בידוד, אפיון, תפוקה גבוהה של העכבר הראשי כליות צינורי בתאי אפיתל

סרטונים קשורים

0 צפיות

06:32

התפתחות תרביות ראשוניות של תאי אפיתל צינוריים בכליה אנושית בחד-שכבות ובתנאים תלת מימדיים

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:06

בידוד תאי אפיתל פרוקסימליים ראשוניים אנושיים והשימוש בהם ביצירת מודל מיקרופיזיולוגי של הצינורית הפרוקסימלית הכלייתית

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 1 אוגוסט 2026