בידוד תאי כליות מורין: טכניקה לבודד וליצור תרבית ראשונית של תאי אפיתל צינורית הכליה

כדי לבודד תאי אפיתל צינוריים כלייתיים או TECs, התחל בלקיחת כליית עכבר מבודדת טרייה בצלחת פטרי. מקלפים את קפסולת הכליה - השכבה החיצונית הדקה המקיפה את הכליה - ומסירים את המדולה או את החלק הפנימי ביותר של הכליה, ומשאירים את קליפת המוח המכילה את הצינורית ואת תאי האפיתל הצינוריים.

טוחנים את חלקי הכליה הנותרים לחתיכות קטנות ודוגרים אותם במאגר עיכול חם המכיל את האנזים קולגנאז. קולגנאז מפרק את חלבון הקולגן שמחזיק את רקמות הכליה יחד, ומשחרר את צינוריות הכליה ואת תאי הכליה לתרחיף.

סנן את התרחיף כדי להסיר רקמות כליה לא מעוכלות. לאחר מכן, הוסיפו לסינון אמצעי תרבית מקוררים מראש. הטמפרטורה הנמוכה יותר מנטרלת קולגנאז ועוצרת את עיכול הרקמות הנוסף. צנטריפוגה את המסנן במהירות נמוכה כדי לאפשר לצינורות הצפופים יותר ולתאים הצינוריים להתיישב בעוד סוגי תאים וזיהומים אחרים נשארים תלויים.

הסר את השבר הלא רצוי הזה והוסף מצע תרבית כדי להשעות מחדש את הגלולה. זרעו את התרחיף בכלי תרבית מצופה קולגן ודגרו. התאים הצינוריים החופשיים נצמדים היטב לקולגן בעוד הצינורות נשארים תלויים. תת-תרבות להסרת הצינורות הלא מחוברים וקבלת התרבות הראשונית של תאי אפיתל צינוריים.

כדי לעבד את הכליות שנקטפו, ראשית, הסר את כמוסות הכליה והמדולה. לאחר מכן, טוחנים את שתי הכליות לחתיכות זעירות ומדגרים אותן ב -10 מיליליטר של מאגר עיכול בתנור