חומצה תקופתית Schiff או PAS צביעה: שיטה להעריך את העיוותים המבניים של glomerulus
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:18 דק׳ • April 30th, 2023
הגלומרולוס היא רשת מורכבת של נימים בתוך הכליה המסננת פסולת ומסירה נוזלים מיותרים מהדם. קצב הסינון הכלייתי תלוי במבנה מיוחד זה, אותו ניתן לבחון באמצעות צבע חומצה תקופתית שיף או PAS.
כדי להתחיל, קח קטע קליפת כליה פרפינית על שקופית זכוכית. טפל בשקופית עם קסילן. מולקולות קסילן ממיסות את שעוות הפרפין מקטע הרקמה. לאחר מכן, חשוף את הדגימה לירידה בריכוזי האלכוהול. אלכוהול מסיר עקבות של קסילן תוך החזרת לחות לחלק הרקמה לקשירה לאחר מכן של הכתם.
כעת, הוסף חומצה תקופתית לדגימה. חומצה תקופתית ממירה את הדיולים הקיימים ברקמות הפוליסכרידים, כגון גליקוגן או מוצין, לאלדהידים. אלדהידים אלה מגיבים עם המגיב של שיף, שילוב של פוקסין-חומצה גופרתית, ויוצרים צבע בצבע מג'נטה שמכתים את קטע הרקמה. שטפו את השקופית כדי להסיר כתמים עודפים.
לאחר השטיפה, הוסיפו ברזל-המטוקסילין, כתם נגד גרעיני שנקשר ל-DNA וצובע אותו בסגול. שטפו כדי להסיר כתמים עודפים. לבסוף, יש לייבש את הדגימה בעוצמות הולכות וגדלות של אלכוהול ואחריו קסילן, המשמש כחומר ניקוי. שלב זה מסייע בשיפור הניגודיות של קטע הרקמה לבדיקה מיקרוסקופית.
ניתן לדמיין מחלה גלומרולרית כעיבוי של קרום הבסיס, נימים משתנים ותאים חריגים הקשורים לתפקוד כליות לקוי.
להדמיה מפורטת של התאים הגלומרולרים והמטריצה המזנגיאלית, יבש את דגימות קליפת הכליה הקבועות המשובצות בפרפין ב-37 מעל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים