הזרקת אגן כליות הידרודינמית: טכניקה להעברת DNA ישירות לתאי כליות של מודל מורין

כדי להעביר DNA פלסמיד ישירות לתאי הכליה של העכבר, התחל בהנחת עכבר מורדם במצב רוחבי. הכן את העכבר על ידי הסרת פרוות הגב שלו מהצד. אתר מקום חתך מתאים באגף השמאלי, מתחת לכלוב הצלעות.

צרו חריץ קטן בעור ובשכבות השרירים שמתחת. לאחר מכן, הפעל לחץ עדין על חלל הבטן כדי לחשוף את הכליה דרך מקום החתך. הסר חלקית את רקמת השומן הפרינפרית המכסה כדי לדמיין את אגן הכליה.

כעת, קח מזרק המכיל DNA פלסמיד במאגר אספקה הידרודינמי. הכנס את המחט ישירות לאגן הכליה - חלק משולש ומורחב של השופכן בכליה. הזרקו את תמיסת הפלסמיד במהירות כך שה- DNA יגיע ישירות לפרנכימה הכלייתית - החלק התפקודי של הכליה המסנן דם.

אספקה מהירה של נפח נוזלים גדול דרך אגן הכליה בונה לחץ גבוה, ויוצרת נקבוביות חולפות בקרום הפלזמה של תאים פרנכימליים בכליות. זה מקל על כניסת פלסמידים לתאים. בסופו של דבר, הנקבוביות הללו נסגרות, ולוכדות את הפלסמידים בתוך התאים.

לבסוף, משוך את המחט והחזיר את הכליה לחלל הבטן. לתפור את שכבות העור והשרירים במקום החתך.

ללבוש כפפות כירורגיות סטריליות ולהתחיל מצד החתך, לספוג את החיה עם ספוגית כלורהקסידין/אלכוהול חדשה שלוש פעמים בתנועה סיבובית. כעת, אתר את אתר החתך. צובטים את העור בפינצטה, ובעזרת מספריים חותכים את שכבת העור כסנטימטר אחד מעמוד השדרה מתחת לכלוב הצלעות. בצע חתך מרכזי נוסף למטה בשכבת השריר. אתר את הכליה, ומב