הזרקת אגן כליות הידרודינמית: טכניקה להעברת DNA ישירות לתאי כליות של מודל מורין

כדי להעביר DNA פלסמיד ישירות לתאי הכליה של העכבר, התחל בהנחת עכבר מורדם במצב רוחבי. הכן את העכבר על ידי הסרת פרוות הגב שלו מהצד. אתר מקום חתך מתאים באגף השמאלי, מתחת לכלוב הצלעות.

צרו חריץ קטן בעור ובשכבות השרירים שמתחת. לאחר מכן, הפעל לחץ עדין על חלל הבטן כדי לחשוף את הכליה דרך מקום החתך. הסר חלקית את רקמת השומן הפרינפרית המכסה כדי לדמיין את אגן הכליה.

כעת, קח מזרק המכיל DNA פלסמיד במאגר אספקה הידרודינמי. הכנס את המחט ישירות לאגן הכליה - חלק משולש ומורחב של השופכן בכליה. הזרקו את תמיסת הפלסמיד במהירות כך שה- DNA יגיע ישירות לפרנכימה הכלייתית - החלק התפקודי של הכליה המסנן דם.

אספקה מהירה של נפח נוזלים גדול דרך אגן הכליה בונה לחץ גבוה, ויוצרת נקבוביות חולפות בקרום הפלזמה של תאים פרנכימליים בכליות. זה מקל על כניסת פלסמידים לתאים. בסופו של דבר, הנקבוביות הללו נסגרות, ולוכדות את הפלסמידים בתוך התאים.

לבסוף, משוך את המחט והחזיר את הכליה לחלל הבטן. לתפור את שכבות העור והשרירים במקום החתך.

ללבוש כפפות כירורגיות סטריליות ולהתחיל מצד החתך, לספוג את החיה עם ספוגית כלורהקסידין/אלכוהול חדשה שלוש פעמים בתנועה סיבובית. כעת, אתר את אתר החתך. צובטים את העור בפינצטה, ובעזרת מספריים חותכים את שכבת העור כסנטימטר אחד מעמוד השדרה מתחת לכלוב הצלעות. בצע חתך מרכזי נוסף למטה בשכבת השריר. אתר את הכליה, ומבלי לגעת בה, חשוף אותה בעדינות מחלל הבטן על ידי הפעלת לחץ עדין ויציב על הבטן עם האצבעות.

חשיפת הכליה היא לפעמים קשה. הפעל לחץ עדין על הבטן ועמוד השדרה כדי למנוע פגיעה בטחול. אם יוצאים איברים אחרים מלבד הכליה, החזירו אותם בעדינות לחלל הגוף באמצעות מלקחיים סגורים במידת הצורך.

לאחר מכן, הפרד בעדינות את הכליה מהשומן שמסביב בדיוק מספיק כדי לדמיין את אגן הכליה, שניתן לראות כנקודה לבנה קטנה. לאחר הדמיית אגן הכליה, השתמש במלקחיים סגורים כדי לדחוף כלפי מטה את הצד הימני של הכליה כך שאגן הכליה יישאר בטווח ראייה. לאחר מכן, אחוז במזרק האינסולין הטעון ביד ימין על ידי החזקתו במקביל למשטח העבודה והכנס את המחט בזהירות לאגן הכליה.

לאחר החדרת המחט, הזריק את התמיסה במהירות תוך 3 שניות. הניחו למחט להישאר במקומה למשך כ-10 שניות כדי למנוע זרימה חוזרת של התמיסה. לאחר מכן, הסר את המחט לאט ובזהירות והחזיר את האיבר לחלל הבטן על ידי מתיחת מקום החתך בעדינות באמצעות מלקחיים סגורים. כעת, תפר את שכבת השריר עם 5-0 תפרים נספגים והניח 2 עד 4 קשרים עצמאיים. באופן דומה, יש לתפור את שכבת העור עם תפרי ניילון 5-0 או 6-0 שאינם נספגים ולהניח 2 עד 4 קשרים עצמאיים.