יצירת מודל קרצינומה של תאי כליה: פרוטוקול לפיתוח מודל RCC מורין אורתוטופי על ידי השתלה תוך כלייתית של תאים סרטניים

השתלת תאי קרצינומה של תאי כליה, או RCC, מעכבר תורם לכליה של עכבר מושתל מדוכא חיסון מובילה לפיתוח מודל RCC אורתוטופי.

כדי לפתח מודל RCC אורתוטופי, התחל בהנחת עכבר חסר חיסון מורדם במצב שכיבה על לוח דיסקציה. כעת, השתמש באזמל כדי לבצע חתך כירורגי בצד שמאל של העכבר, תוך שמירה על הצפק הבסיסי שלם.

מיששו את העכבר על ידי הפעלת לחץ עדין מלמטה. שלב זה עוזר לדמיין את הכליה דרך הצפק השקוף. לאחר מכן, קח מזרק המכיל תרחיף תאי RCC במדיום מתאים. בעזרת מחט הזריקו את תרחיף התאים לכליה מבלי לפגוע בצפק.

משוך את המחט ואטום את מקום החתך באמצעות דבק רקמות. אפשר לעכבר להתאושש ולעקוב אחר צמיחת הגידול במרווחי זמן רצויים. בתחילה, תאי סרטן הכליה המוזרקים מושתלים בכליה. תאים אלה מתרבים לאחר מכן ויוצרים גידולים.

לאחר מכן, כמה תאים עשויים להתנתק מהגידול הראשוני ולהתפשט בתוך חלל הצפק. תאי גידול נודדים אלה יכולים לפלוש לרקמת הריאה ולשלוח גרורות ליצירת גידולים משניים.

כדי להכין את תאי הגידול של Renca, ראשית, יש לחבר את תרבית התאים עם 0.25% טריפסין ב-HBSS לאחר שטיפה עם PBS. נטרל את התגובה לאחר 5 דקות עם מדיום RPMI מלא. העבירו את התאים לצינור חרוטי לצנטריפוגה והשעו מחדש את הגלולה ב-HBSS טרי.

לאחר הספירה, התאם את הנפח ל-2 כפול 10 עד שישי תאים לריכוז מיליליטר ב-HBSS, ושאב את התאים למזרק של 1 מיליליטר המצויד במחט בגודל 18. לאחר מכן, הניחו וילון כירורגי סטרילי על כרית חימום ואשרו את רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן. הסר את השיער מהצד השמאלי של העכבר ומרח משחה וטרינרית על העיניים.

לאחר מכן, ספוג את מקום ההשתלה בחומר חיטוי של 5% פובידון-יוד, והשתמש באזמל סטרילי כדי לבצע חתך יחיד של 1 עד 1.5 סנטימטר בצד שמאל, תוך הקפדה לא לחדור לצפק. בעזרת מספריים, הפרד את הדרמיס מהצפק, טפח את אתר החתך בגזה כותנה סטרילית כדי להסיר דם. לאחר מכן, אחזו בראש ביד שמאל ותמכו באגף ביד ימין כדי לאתר את הטחול דרך הצפק.

בעזרת אצבע אחת מיד ימין, משש את העכבר מתחתיו. הכליות צריכות להיות גלויות. תוך שמירה על אחיזה איתנה בבעל החיים כדי לספק מתח על פני הצפק והכליה, בקש מעוזר להעביר לאט לאט 0.1 מיליליטר מתאי הרנקה דרך הצפק השלם למרכז הכליה. החזק את המחט במקומה למשך 5 עד 10 שניות כדי להפחית את הזרימה החוזרת של התאים. לאחר מכן, סגור את החתך בשכבה דקה של דבק רקמות ציאנואקרילט.