הכנת הרכבה שטוחה לכליה: הליך לנתח ולהכין תושבת שטוחה לאנליזה מיקרוסקופית של כליה של דגי זברה בוגרים

דג הזברה הבוגר מכיל כליה אחת שטוחה המחוברת לדופן הגוף הגבית דרך רקמות חיבור. הוא מורכב משלושה אזורים עיקריים: ראש, גזע וזנב. היחידה הפונקציונלית של הכליה, נפרונים, מסועפים מאוד ומתנקזים לשתי תעלות איסוף עיקריות.

כדי לבודד את הכליה, ראשית, הכינו דג זברה בוגר שעבר המתת חסד כשצד הגחון שלו פונה כלפי מעלה. בצע חתך מאחורי האופרקולום - דש גרמי המכסה את הזימים - כדי להסיר את הראש. לאחר מכן, בצע חתך נוסף מהראש לבסיס סנפיר הזנב או הזנב כדי לחשוף ולהסיר את האיברים הפנימיים.

כעת, פתחו את דפנות הגוף כדי לדמיין את הכליה. נתח את רקמת החיבור הבסיסית כדי לנתק את הכליה מדופן הגב. העבירו את האיבר לבקבוקון המכיל מאגר מתאים, שטפו אותו היטב כדי להסיר פסולת. המאגר עוזר לספק תנאים פיזיולוגיים. לאחר הכביסה, הניחו את הכליה, רוויה בלחות עם בופר, על מגלשת זכוכית.

ודא שהכליה שטוחה לחלוטין, ובצע חתכים ברקמת החיבור במידת הצורך. שלב זה מסייע בהדמיה קלה במהלך ההדמיה. לבסוף, אבטח את הכנת העוגב באמצעות כיסוי המודבק עם חתיכות חימר דוגמנות בפינותיו. החימר מסייע במניעת עיוות רקמות. הרקמה השטוחה מוכנה כעת לניתוח מיקרוסקופי.

כדי להתחיל, יש להוציא כל תמיסה נוספת מדג מורדם ולהניח אותה על טישו או מגבת נייר. לאחר הסרת הראש והאיברים הפנימיים, השתמש במחטי חיתוך עדינות במיוחד כדי לפתוח את דפנות הגוף. אתר את איבר הכליה, הנצמד לדופן הגב של החיה.

השתמש במלקחיים עדינים כדי לנתק את הכליה מדופן הגב. הכניסו בעדינות את הכליה לבקבוקון זכוכית של 5 מיליליטר המכיל 1x PBS ושטפו שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחת. הסר את הכליה בעזרת פיפטת העברה והנח אותה על מגלשת זכוכית נקייה עם טיפה אחת עד שתיים של PBS 1x.

השתמש במלקחיים עדינים כדי לשטח את הכליה על המגלשה, וודא שאף רקמה לא התכרבלה או התהפכה על עצמה בדרך אחרת. ניתן להשתמש בכלי חוט טונגסטן לביצוע חתכים קטנים ברקמת החיבור כדי להקל על המיקום השטוח של הכליה.

לאחר מכן, הניחו חתיכות קטנות של חימר דוגמנות על כל פינה של כיסוי זכוכית בגודל 18 על 18 מילימטר. הנח לאט את הכיסוי על הכליה, תוך שמירה על זווית קלה כדי למזער לכידת בועות אוויר. הוסף טיפה נוספת של 1x PBS כדי למלא את הרווח בין החלקה להחלקה במידת הצורך.