דה-פיגמנטציה ושימור של כליה של דג זברה: טכניקה להכנת כליה של דג זברה בוגר להכתמה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:36 דק׳ • April 30th, 2023
כליית דג הזברה הבוגרת היא מבנה שקוף הממוקם בסמוך לדופן הגוף הגבית של הדג. הכליה מציגה נוכחות של כתמים שחורים שטחיים המתאימים למלנוציטים המפוזרים - תאים מיוחדים המגנים על תאי הגזע של הכליה מפני קרינת UV מזיקה.
כדי להסיר פיגמנטים ולהכין את הכליה לצביעה, התחל בנטילת דג זברה בוגר שעבר המתת חסד. טבלו את כל דג הזברה בתמיסת קיבוע מתאימה ודגרו למשך הזמן הרצוי. הדגירה מאפשרת לתמיסה המקובעת לחדור לגוף הדג ולנעול את מרכיבי הרקמה במקומם.
לאחר מכן, הניחו את דג הזברה בצורה גחונית והסירו את ראשו. בצע חתך גחון ארוך המתחיל מתחת לאזור הראש ונמשך עד סנפיר הזנב. הסר את האיברים כדי לחשוף את הכליה הבסיסית. בעזרת מלקחיים יש לנתק את הכליה מדופן הגב ולהניח אותה בבקבוקון זכוכית.
טפל בכליה המנותחת בריכוז הולך וגדל של תמיסת סוכרוז. תמיסת סוכרוז יוצרת סביבה איזוטונית המונעת התכווצות כליות. לאחר מכן, דגרו את הכליה בתמיסת הלבנה להסרת פיגמנטציה מלנוציטית. זה עוזר בהדמיה טובה יותר של הכליה במהלך הליכי צביעה נוספים.
לבסוף, החלף את תמיסת ההלבנה בתמיסת חסימה כדי לחסום אתרים לא רצויים ולמנוע כתמים לא ספציפיים. כליית דג הזברה הבוגרת נטולת הפיגמנטים מוכנה כעת לשלבי הצביעה הבאים.
כשהוא מוכן, השתמש במלקחיים עדינים כדי לנתק בזהירות את הכליה מדופן הגוף הגבי ולהניח את האיבר בבקבוקון זכוכית. שטפו את הכליה המנותחת שלוש פעמים ע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים