פתולוגיית הרחבה: שיטה להדמיה אופטית ברזולוציה גבוהה של דגימות רקמה קליניות
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:14 דק׳ • April 30th, 2023
פתולוגיה של התפשטות, או ExPath, היא טכניקת הכנת דגימה לדגימות ביולוגיות, המאפשרת מיקרוסקופ אור קונבנציונלי לדמות מבנים בקנה מידה ננומטרי על ידי הרחבתם באמצעות מערכת פולימרים.
ראשית, קח שקופית דגימת רקמה מעובדת מוכתמת חיסון וכסה אותה בתמיסת עיגון המכילה קבוצות חלבון ופולימרים כאחד. הקבוצה המגיבה לחלבון של מגיב העיגון נקשרת לאמינים של ביומולקולות בתוך התאים.
לאחר מכן, הוסיפו תמיסת ג'ל מתאימה מעל הדגימה ודגרו כדי לאפשר את דיפוזיה בתוך הרקמה. הקבוצה המגיבה לפולימר של מגיב העיגון נקשרת למונומרים החופשיים בתוך תמיסת הג'ל, ומאפשרת לביו-מולקולות לעגן לפולימר כשהוא מתפלמר.
לאחר השלמת פילמור הדגימה, כסו את השקופית בתמיסת פרוטאינאז. חלבונים מעכלים חלבוני שלד כדי להסיר כל התנגדות מבנית, ומאפשרים לתאים להתרחב מבלי להיקרע. עם עיכול אנזימטי, דגימת הג'ל מתנתקת מהמגלשה ועוברת לתרחיף.
כעת, העבירו את הדגימה למאגר כביסה מתאים במיכל תואם מיקרוסקופ. לאחר מכן, החלף את המאגר במים ודגירה. הפולימר סופג כמות עצומה של מים ביחס למסתו ומתנפח.
ככל שהפולימר מתרחב, הביו-מולקולות המעוגנות לרשת הפולימרים מתרחקות זו מזו תוך שמירה על האוריינטציה המרחבית שלהן. זה מאפשר הדמיה קלה שלהם תחת מיקרוסקופ אור קונבנציונאלי.
הכנת תמיסת עיגון לפי הוראות כתב היד. מניחים את המגלשות בצלחת פטרי בגודל 100 מילימטר. פיפטו את תמיסת העיגו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים