בדיקה מבוססת ביולומינסנציה תאית: שיטת תפוקה גבוהה לבדיקת תרופות קומבינטורית

0 views • 3:17 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ביולומינסנציה תאית היא גישה רגישה ומהירה ביותר להקרנה בקנה מידה גדול של תרופות אנטי סרטניות.

טכניקה זו משתמשת בתאי גידול המבטאים לוציפראז - אנזים המזרז תגובה כימית מייצרת אור, הגורמת לתאי המארח לזהור בחושך. עוצמת הזוהר הנפלט עומדת ביחס ישר לצפיפות התאים החיים.

כדי להתחיל, זרע תאים המבטאים לוציפראז בצלחת תרבית שקופה אופטית המצופה במטריצה חוץ-תאית או ECM ודגירה.

במהלך הדגירה, ה- ECM מקדם היטב את הצמדת התאים לתרבות.

לאחר מכן, קח מלאי מרוכז של שילוב התרופות והוסף כמויות שונות של אמצעי תרבית להכנת דילול סדרתי של תערובת התרופות.

כעת, הסר את מדיום התרבות מהתאים הדבוקים. הוסף דילולים שונים של שילוב התרופות ודגירה.

במהלך הדגירה, שילוב התרופות פועל באופן סינרגטי על מטרות תאיות.

כעת, הסר את המדיום המכיל תרופה והוסף מדיום טרי המכיל לוציפרין.

לוציפרין מתפזר על פני הממברנה ונכנס לתאים. הלוציפראזות המתבטאות על ידי התאים משתמשות ב-ATP תאי כדי לחמצן לוציפרין ולפלוט אותות אור.

כמת את הביו-לומינסנציה התאית תחת מערכת הדמיה.

ירידה בפליטת האור עם ריכוז מוגבר של תרופות מעידה על ירידה בכדאיות התאים. זה מתאם להשפעה האנטי-פרוליפרטיבית של התרופה על תאי המטרה.

מצפים צלחות תחתונות אופטיות של 96 בארות בתערובת מטריצה חוץ-תאית כגון מטריג'ל ודוגרים אותן למשך שעה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. מסירים את עודפי התערובת ושוטפים בעדינות את הצלחות פעם אחת עם PBS.

לאחר מכן, זרעו תאי XG387-Luc בצפיפות של 1,000 תאים ב-100 מיקרוליטר של מדיום תרבית לכל באר של הצלחות המצופות ותרבו אותם למשך הלילה. למחרת, התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ כדי לאשר את הצמדתם לצלחת.

לאחר מכן, הכינו תמיסת טמוזולומיד של 200 מיקרו-מולרית ותמיסות 2-מיקרו-מולריות של החומרים הממוקדים במדיום התרבית. לבדיקת תרופות משולבות, הסר את המדיום הריק והוסף את המדיום המכיל טמוזולומיד 200 מיקרומולר או חומר ממוקד 2 מיקרומולרי, או שילוב של שניהם, לכל באר עבור 3 שכפולים טכניים לכל טיפול.

דגרו את הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס ו -5% פחמן דו חמצני למשך 3 ימים. צלם תמונות של הביו-לומינסנציה התאית בצלחת באמצעות מערכת הדמיית ספקטרום IVIS. באמצעות התוכנה המובנית, צור אזורים מעגליים מרובים של אזור העניין וכמת את הביו-לומינסנציה התאית.

04:47

תאי יונקים האוטונומיים bioluminescent לניטור רציף וזמן אמת של Cytotoxicity

Related Videos

0 Views

09:17

הדמיה פליטת אור של דגם עם מערכת חיסון בבעלי חיים לגליובלסטומה

Related Videos

0 Views

09:09

תפוקה גבוהה, בזמן אמת, בדיקת Dual-readout של פעילות מיקרוביאלית תאיים Cytotoxicity Cell איקריוטיים

Related Videos

0 Views

10:38

ניטור מקצבי Cell-אוטונומי יממת שעון של ביטוי גנים באמצעות כתבי פליטת האור לוציפראז

Related Videos

0 Views

02:57

בדיקה מבוססת פלואורסצנטיות המשתמשת בלימפוציטים מהונדסים לבדיקת תרכובות אימונומודולטוריות

Related Videos

0 Views

12:55

הקרנה פונקציונלית תפוקה גבוהה באמצעות assay בלוציפראז Dual-זוהר תוצרת בית

Related Videos

0 Views

10:13

פלטפורמת הקרנה מבוססת לוציפראז Multiplexed לחקירת מלחמה בסרטן הקשורים להעברת אותות בתאים בתרבית

Related Videos

0 Views

09:39

רגישות סמים של adenylyl cyclase: התייעלות Assay ומזעור למולקולה קטנה ויישומים הקרנת siRNA

Related Videos

0 Views

08:43

Assay לימפוציטים הקרינה מבוסס מתאים להקרנה תפוקה גבוהה של מולקולות קטנות

Related Videos

0 Views

09:57

מערכת לסינון יעילות Cytotoxicity של מעכבי מיקוד תאי שחפת Mycobacterium

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026