בדיקת פגוציטוזה מיקרוגליאלית: בדיקת מבחנה לביסוס מודל פגוציטוזה מיקרוגליאלית עבור תאי נוירובלסטומה באמצעות מקרופאגים iPSC

מיקרוגליה הם מקרופאגים במוח המסייעים בהסרת פתוגנים, פסולת תאים ותאי עצב סרטניים או נוירובלסטומה בתהליך הנקרא פגוציטוזיס.

כדי לחקות פגוציטוזיס במבחנה, התחל בתרבית של תאי נוירובלסטומה קבועים בפרפורמלדהיד.

פרפורמלדהיד, מקבע כימי, גורם להפצה אקראית של פוספוליפידים ממברניים כמו פוספטידילסרין, וכתוצאה מכך העברתם למשטח החיצוני של קרום התא ובמקביל מייצב את מבנה התא.

כעת, הוסיפו צבע פלואורסצנטי רגיש ל-pH לתרבית תאי הנוירובלסטומה ודגרו.

מולקולות הצבע נקשרות לקבוצות האמין של פוספטידילסרין על פני תא הנוירובלסטומה.

צנטריפוגה את הצינור והסר את הסופרנטנט המכיל מולקולות צבע לא קשורות. שוטפים את כדור התא עם מאגר וצנטריפוגה מתאימים.

הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הגלולה במדיום התרבית.

לאחר מכן, זרעו מקרופאגים מוכתמים מראש בצלחת תרבית. מקרופאגים מוכתמים יופיעו באדום עם גרעין כחול.

הוסף תאי נוירובלסטומה מוכתמים לתרבית זו ודגר.

קולטני המקרופאגים-פגוציטים מזהים את הפוספטידילסרין החשוף על תאי נוירובלסטומה ומפנימים אותם בתאי ממברנה הנקראים פגוזומים.

הפאגוזומים נודדים ומתמזגים עם ליזוזומים, וחושפים תאי נוירובלסטומה לסביבת ה-pH הנמוכה של הליזוזום. pH נמוך מפעיל את מולקולות הצבע על תאי נוירובלסטומה, וגורם לצבע הצבע להשתנות.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, תא הנוירובלסטומה הפגוציטוזי נראה צהוב בתוך המקרופאגים האדו