בידוד גרעינים מרקמות גליומה טריות קפואות: שיטה להשגת גרעינים שלמים מדגימות גידולי גליומה

כדי לבודד גרעינים, התחל בלקיחת דגימת גליומה קפואה טרייה - גידול שמקורו בתאי הגליה של המוח - בצלחת פטרי.

מניחים את צלחת הפטרי על קרח כדי למנוע הידרדרות רקמות.

לאחר מכן, טחנו את דגימת הרקמה לחתיכות קטנות.

הוסף מאגר ליזה מקורר מראש לחתיכות הרקמה הטחונה. מעבירים את התערובת להומוגניזטור של Dounce. בעזרת העלי, הומוגניזציה של הרקמה כדי לפרק את התאים וליזום ליזה.

כעת, העבירו את ההומוגנאט לצינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל מאגר ליזה טרי.

לשבש מכנית את ההומוגנאט באמצעות קצה פיפטה רחב קדח. שלב זה מקל על שחרור אברונים ציטופלזמיים מהתאים.

לאחר מכן, באמצעות מסננת תאים בגודל מתאים, סנן את ההומוגנאט לצינור טרי כדי להסיר פסולת רקמות ומזהמים אחרים.

לאחר הסינון, קח את המסנן המכיל אברוני תאים שונים.

צנטריפוגה המסוננת במהירות נמוכה כדי לגלול את הגרעינים הצפופים יותר בתחתית בעוד אברוני התא האחרים נשארים בסופרנטנט.

השליכו את הסופרנטנט המכיל אברון . אחסן את הגלולה העשירה בגרעינים גולמיים במאגר אחסון מתאים להמשך ריצוף במורד הזרם.

התחל בהעברת 10 עד 60 מיליגרם של דגימת רקמה קפואה טרייה לצלחת פטרי מקוררת מראש. טוחנים או קוצצים את הרקמה הקפואה הטרייה בעזרת סכין גילוח לחתיכות קטנות על קרח. הוסף 500 מיקרוליטר של מאגר גרעינים צוננים על הרקמה בצלחת הפטרי.

לאחר מכן, העבירו את התערובת ל-Douncer. טפטפו את חתיכות הרקמה עם ה