שימור בהקפאה בהקפאה מהירה של מוח עכבר שלם לצורך ניתוח היסטולוגי

כדי לשמר בהקפאה דגימת מוח של עכברים על ידי הקפאה מהירה, התחל בלקיחת מלאה בתמיסת איזופנטן - נוזל מוליך מאוד - וטבול אותה בצנצנת המכילה חנקן נוזלי.

הקפיאו את האיזופנטן עד שהתמיסה הופכת לצמיגה.

בינתיים, קח דגימת מוח שלמה של עכבר עם קידומת בתמיסת סוכרוז. טיפול זה מונע עיוות של רקמת המוח בשלבים הבאים.

הסר את דגימת המוח מתמיסת הסוכרוז וספוג אותה יבשה כדי להסיר עקבות של סוכרוז.

לאחר מכן, מקם את המוח בכיוון הרצוי לתוך קריומולד עמוק המכיל שכבה של מדיום הטבעה.

שכבו את המוח בקריומולד עם אמצעי הטמעה נוספים כדי להבטיח שכל האיבר מכוסה.

לאחר מכן, טבלו את הקריומולד המכיל את המוח המוטבע לתוך אמבט האיזופנטן המצונן. הקירור המהיר של רקמת המוח לטמפרטורה נמוכה במיוחד מבטיח שמירה על ארכיטקטורת המוח ללא כל עיוות.

כעת, אפשרו לדגימת המוח לקפוא עד שהמדיום המוטמע מתמצק ויוצר שכבה ג'לטינית סביב המוח, המחזיקה אותו במקומו.

לאחר ההקפאה, הוציאו את הקריומולד מאמבט האיזופנטן ועטפו את מוח העכבר השמור בהקפאה ביריעת נייר כסף.

אחסן את הדגימה במינוס שמונים מעלות צלזיוס להמשך ניתוח היסטולוגי.

כדי להתכונן לשימור בהקפאה, מלאו צנצנת באיזופנטן/2-מתילבוטן קר והניחו את הצנצנת בכלי מלא בחנקן נוזלי. בזמן שהממס מתקרר, יש לייבש את המוח על פיסת נייר פילטר ולהניח את המוח בתבנית קריולוגית מסומנת.

הוסף בזהירות כ-5 מיליליטר של מדיום חיתוך בטמפרטורה אופטימלית למרכז הקריומולד והנח את המוח לתוך התבנית בכיוון הרצוי. בעזרת מלקחיים נקיים, הכניסו במהירות את הקריומולד לאיזופנטן/2-מתילבוטן המצונן, למשך 30 עד 40 שניות.

לאחר שאמצעי החיתוך התמצק, העבירו את הקריומולד על קרח יבש ועטפו את רקמת המוח והקפואה בנייר אלומיניום לאחסון של מינוס 80 מעלות צלזיוס.