אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 2:41 דק׳ • April 30th, 2023
כדי להבדיל בין אוכלוסיות תאים ספציפיות ברקמת גידול מוח הטרוגנית של עכבר לצורך בידודם לאחר מכן, התחל בלקיחת שקופית זכוכית הנושאת את החלק המעניין של רקמת גידול המוח השמורה בהקפאה.
דגירה ברצף של הרקמה בריכוזים הולכים ופוחתים של אתנול. אתנול ממיס את המדיום המוטמע שחדר לרקמה ומקבע את הרקמה תוך שמירה על שלמות חומצת הגרעין.
בנוסף, אתנול מחזיר לחות לרקמה, ומאפשר אפילו צביעה במהלך השלבים הבאים.
כעת, טפל ברקמה עם סגול קרסיל. סגול קרזיל - צבע בסיסי - מכתים רכיבים תאיים חומציים כמו חומצות גרעין.
לאחר מכן, יש לצבוע את הרקמה עם Eosin Y. Eosin Y - צבע חומצי - מכתים רכיבים תאיים בסיסיים כגון חלבונים ציטופלזמיים.
שלב צביעה דיפרנציאלי זה מסייע להבחין בין הציטופלזמה למבנים תאיים אחרים, ומאפשר זיהוי תאים מעניינים.
לאחר הצביעה, טבלו את הרקמה בריכוזים הולכים וגדלים של אתנול כדי לייבש את הרקמה ולמנוע עיוות מוגזם של הרקמות.
לאחר מכן, שטפו את הרקמה עם קסילן. קסילן עוקר ומסיר אתנול מקטע הרקמות.
לבסוף, הוסף פתרון הרכבה מתאים על קטע הרקמה כדי לשמר את מורפולוגיה של הרקמות.
קטע הרקמה המעובד מוכן לשימוש למיקרו-דיסקציה בלייזר - תהליך המאפשר בידוד מדויק של תאים ספציפיים מהרקמה.
טבלו את השקופיות בטבילות אתנול יורדות ברצף של 30 שניות, ולאחר מכן צביעת תמיסת קריסטל סגול למשך 20 שניות ו-5 שניות בתמיסת אאוזין Y של 0.5%.
בתום הדגירה של eosin Y, השתמש בנייר פילטר כדי לייבש את השקופיות ולייבש את השקופיות בטבילות אתנול עולות ברצף. לאחר טבילת אתנול של 60 שניות, שטפו את השקופיות במיכל קסילן למשך 3 דקות.
לאחר מכן, יבש את השקופיות על משטח נטול RNase בטמפרטורת החדר למשך 10 שניות לפני הרכבת הדגימות במדיום הרכבה שהוכן עם מים ללא RNase. לאחר 10 עד 20 שניות, העבירו את השקופיות לפלטפורמת המיקרוסקופ.