בידוד מבוסס SEC של שלפוחיות חוץ-תאיות שמקורן במיקרוגליה: טכניקה לבידוד בועיות חוץ-תאיות ממדיית תרבית מותנית במיקרוגליה
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:37 דק׳ • April 30th, 2023
תאי מיקרוגליה משחררים מתווכים חיסוניים בצורת שלפוחיות חוץ-תאיות או EVs, כולל גופים אפופטוטיים גדולים יותר ושלפוחיות קטנות יותר בגודל מיקרו, לתוך מצע גדילה במבחנה.
כדי לבודד רכבים חשמליים, התחל בנטילת מדיה מותנית מיקרוגליה. אמצעי תרבית זה מכיל תאי מיקרוגליה יחד עם ה-EVs המשוחררים. צנטריפוגה את המדיה כדי לגלול את התאים.
אסוף את הסופרנטנט המכיל את ה-EVs, הפסולת ואגרגטים של חלבונים בצינור טרי. שוב צנטריפוגה כדי להסיר פסולת תאית וגופים אפופטוטיים גדולים.
העבירו את הסופרנטנט לתוך צינור אולטרה-צנטריפוגה. צנטריפוגה במהירות גבוהה.
השליכו את הסופרנטנט המכיל מדיה משומשת והשהו מחדש את גלולת ה-EV והחלבון המצטברת במאגר הרצוי.
במקביל, קח עמודת כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל עם פילטר מתאים בבסיסה.
אורזים היטב את העמוד עם מטריצת סינון ג'ל המורכבת מחרוזי ג'ל כדוריים היוצרים מסננת נקבובית בגודל נקבוביות מוגדר.
טען את מתלה הצבירה EV והחלבון על גבי השלב הנייח.
כאשר המתלים עוברים דרך העמודה, רכבים חשמליים גדולים יותר נעים דרך חללים בין-חלקיקיים בין חרוזי הג'ל, ונוסעים בנתיב קצר יותר. לעומת זאת, אגרגטי החלבון הקטנים יותר נעים לתוך הנקבוביות, עוקבים אחר נתיב ארוך יותר.
כתוצאה מכך, רכבים חשמליים יוצאים ראשונים מהעמודה.
אסוף את השברים המכילים EVs והשתמש בהם לניתוח נוסף.
העבירו את מדיום התרבית המותנה מתרביות מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים