מיצוי שלפוחית חוץ-תאית: טכניקה לבידוד שלפוחיות חוץ-תאיות מדגימות רקמות שלמות באמצעות צנטריפוגה דיפרנציאלית

ברקמות שלמות, שלפוחיות חוץ-תאיות או EVs משתחררות על ידי התאים לנוזל הבין-תאי. אלה כוללים גופים אפופטוטיים, מיקרו-שלפוחיות ואקסוזומים. הרכבים החשמליים ממלאים תפקיד חשוב בשמירה על תקשורת בין תאים.

כדי לחלץ EVs, התחל בלקיחת דגימת רקמה שלמה.

טפל ברקמה עם מאגר דיסוציאציה מתאים. מרכיבי מאגר הדיסוציאציה מפרקים את המטריצה החוץ-תאית הקיימת ברקמה, ובסופו של דבר משחררים את התאים.

העבירו את התרחיף להומוגנייזר ושבשו מכנית את הרקמה עוד יותר כדי לנתק אותה ולשחרר את התאים.

לאחר מכן, צנטריפוגה את ההומוגנאט במהירות נמוכה כדי לגלול את התאים ושברי הרקמות בזמן שה-EVs נשארים בסופרנטנט.

קח את הסופרנטנט לתוך שפופרת חדשה. צנטריפוגה במהירות גבוהה כדי לגלול את רוב הגופים האפופטוטיים הגדולים יותר, ולהשאיר את הרכבים החשמליים הקטנים יותר בסופרנטנט.

אסוף את הסופרנטנט המכיל EV למזרק. סנן את הרכיבים כדי להסיר את כל הגופים האפופטוטיים שנותרו ולאסוף את אוכלוסיית ה-EV בגודל קטן.

צנטריפוגה את המסנן כדי להשיג את ה-EVs בגלולה. השליכו את המאגר שנותר והשעו מחדש את כדור ה-EV בתמיסת סוכרוז. פתרון זה יוצר סביבה איזוטונית עבור הרכבים החשמליים כדי לשמור על המורפולוגיה שלהם.

כעת, אחסן את מתלי ה-EV בארבע מעלות צלזיוס עד לשימוש נוסף.

כדי להתחיל, הכינו 10 מיליליטר של מאגר דיסוציאציה ב-Hibernate-E Medium לכל 0.4 עד 1.0 גרם רקמה. הו