טיהור תת-אוכלוסיות של שלפוחיות חוץ-תאיות: טכניקה לטיהור תת-אוכלוסיות של שלפוחיות חוץ-תאיות באמצעות אולטרה-צנטריפוגה של שיפוע צפיפות

שלפוחיות חוץ-תאיות או EVs הן שלפוחיות בגודל ננו, הטרוגניות, קשורות לממברנה המופרשות על ידי תאים שונים, כולל תאי גידול במוח. הרכבים החשמליים הקטנים הם תת-אוכלוסייה המורכבת מרכבים חשמליים שמקורם אנדוזומלי וממברנה.

כדי לטהר את הרכבים החשמליים הקטנים, התחל בלקיחת רכבים חשמליים שחולצו מראש תלויים במאגר בתוספת סוכרוז השומר על תמיסה הומוגנית ושומר על השלמות המבנית של רכבים חשמליים.

לפתרון זה, אם כן, הוסף נפח מתאים של יודיקסנול - מדיום שיפוע צפיפות אינרטי ולא רעיל - כדי להשיג את הצפיפות הרצויה.

יודיקסנול מסיס את החלבונים המזהמים שיש להסיר מאוחר יותר.

לאחר מכן, הוסף שכבות של תמיסות יודיקסנול בצפיפות יורדת ברציפות כדי ליצור שיפוע צפיפות לא רציף.

צנטריפוגה את הצינור במהירות גבוהה.

בהתאם לשיעורי הציפה שלהם, הרכבים החשמליים הצפופים יותר נודדים לשכבה צפופה באותה מידה של תווך שיפוע בעוד שרכבים חשמליים פחות צפופים נודדים הלאה לשכבה קלה יותר, והמזהמים הצפופים ביותר יוצרים כדור בתחתית הצינור.

כעת, העבירו חלקים קטנים משכבות השיפוע בצינורות טריים המכילים מאגר מתאים.

לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינורות במהירות גבוהה במיוחד בתנאים צוננים.

במהלך צנטריפוגה, טמפרטורה נמוכה מונעת מרכבים חשמליים נזקי חום הנגרמים במהירות גבוהה.

לאחר שה-EVs הטהורים יורדים, הסר את ה-supernatant. השעו מחדש את הרכבים החשמליים במאגר מ