בידוד אסטרוציטים: שיטה להשגת הכנה טהורה של אסטרוציטים קורטיקליים של עכבר

האסטרוציטים בתרבית מבחנה מסייעים לחקור את התפקיד הביולוגי של אסטרוציטים - תאי המוח הנפוצים ביותר.

התחילו עם מוח עכבר יילוד המונח תחת מיקרוסקופ מנתח.

הסר את נורות הריח ואת המוח הקטן.

בצע חתך בקו האמצע בין שתי ההמיספרות כדי להפריד את קליפת המוח.

הסר את קרומי המוח כדי למנוע זיהום בתרבית האסטרוציטים מפיברובלסטים ותאי קרום המוח.

העבירו את חצאי קליפת המוח לתווך קר כקרח וטחנו לחתיכות קטנות.

אסוף את החתיכות בקליפת המוח בצינור המכיל טריפסין. טריפסין, אנזים פרוטאז, מעכל את חלבוני הידבקות התאים, ומקל על הפרדת התאים.

צנטריפוגה לכדור הרקמה המעוכלת.

הסר את הסופרנטנט והוסף מדיום אסטרוציטים לגלולה. פיפטה במרץ לשחרר אוכלוסיית תאים מעורבת של אסטרוציטים, מיקרוגליה ותאי מבשר אוליגודנדרוציטים או OPCs.

זרע את תרחיף התאים הזה לתוך בקבוק תרבית רקמה מצופה פולי-ליזין ודגירה.

התאים הטעונים שלילית מתחברים לפולי-ליזין הטעון חיובית וגדלים על פני כל השטח ליצירת שכבה מתכנסת.

נער את הבקבוק כדי לנתק את המיקרוגליה וה-OPCs הקשורים באופן רופף. הסר את הסופרנטנט המכיל תאים מנותקים.

הוסף טריפסין לשכבת האסטרוציטים. אוספים את התאים והצנטריפוגה.

השעו מחדש את הגלולה וחלקו את האסטרוציטים למספר צלוחות.

לבסוף, העריכו את טוהר תרבית האסטרוציטים על ידי צביעה חיסונית של סמנים ספציפיים לתא.

העבירו את הצלחת המכילה את המוח לסטריאומיקר