תרבית תאי אנדותל מכלי דם זעירים במוח חולדה: הליך לבידוד ותרבית תאי אנדותל מכלי דם זעירים במוח חולדה

כדי לבודד תאי אנדותל במוח, ראשית, העבירו מוח חולדה שנקטף לתוך צלחת המכילה בופר מקורר.

לאחר הסרת המוח הקטן ועצבי הראייה, חלקו את המוח להמיספרות מוחיות. לאחר מכן, הפרד את המוח התיכון מהמוח הקדמי.

הסר את קרומי המוח ואת החומר הלבן המכיל מיאלין מהמוח הקדמי, והשאיר מאחור את קליפת המוח לבידוד כלי המיקרו

.

לאחר מכן, הומוגניזציה של קליפת המוח כדי לשבור את רקמת העצבים והמרכיבים.

צנטריפוגה ההומוגנית להסרת פסולת תאית ומיאלין.

לאחר מכן, טפל בכדור הרקמה עם קוקטייל עיכול המכיל אנזימים קולגנאז, דיספאז ודאוקסיריבונוקלאז.

קולגנאזות ודיספאזות מעכלות את המטריצה החוץ-תאית המטמיעה את המיקרו-כלי ומשחררות את שברי המיקרו-כלי מהרקמה. דאוקסיריבונוקלאזים מפרקים כל DNA חופשי המשתחרר מתאים ליזים.

מערבבים את הנפח הרצוי של ההומוגנט המעוכל עם מדיום שיפוע וצנטריפוגה בצפיפות מתאימה.

השליכו את המיאלין ואת השכבה העליונה המכילה תאים פרנכימליים במוח, ואחריהם את הסופרנטנט.

כעת, טפל בגלולה המכילה מיקרו-כלי עם קוקטייל העיכול כדי לשחרר לחלוטין את שברי המיקרו-כלי המורכבים מתאי אנדותל ופריציטים.

צנטריפוגה את המתלים. השעו מחדש את הגלולה המכילה שבר מיקרו-כלי במדיה מתאימה בתוספת פורומיצין - אנטיביוטיקה.

זרעו את התרחיף לצלחת מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית ודגרו.

שברי המיקרו-כלי נצמדים לציפוי בצלחת. פורומיצין מסלק באופן סלקטיבי פריציט