מחסום דם-מוח מחקה בדיקת חדירות: בדיקת מבחנה להערכת החדירות של חיקוי BBB למולקולות עוקבות

מחסום הדם-מוח, או BBB, המורכב מתאי אנדותל, פריציטים ואסטרוציטים, מווסת את הזרם והשטף של מולקולות ביולוגיות ומסייע בשמירה על הומאוסטזיס במוח.

כדי להעריך את החדירות של מודל BBB במבחנה, התחל עם מודל BBB במבחנה המורכב מתאי אנדותל דבוקים בצד העליון או בצד הדם של הכנסת הממברנה הנקבובית ואסטרוציטים דבוקים בצד הבסיסי או המוחי של הממברנה.

תאי האנדותל עם המטריצה החוץ-תאית שלהם יוצרים קשר עם האסטרוציטים ויוצרים חיקוי BBB.

העבר את נפח המדיה הרצוי מהדם ומצד המוח לצלחת שחורה מרובת בארות למדידת פלואורסצנטיות אופטימלית.

החלף את המדיה מצד הדם של התרבית במדיה המכילה מולקולות מעקב פלואורסצנטיות במשקל מולקולרי קטן.

בתרבית, המגעים בין תאי האנדותל-אסטרוציטים משפרים את המחסום התאי ומייצבים את המחסום ההדוק, ומגבילים את הדיפוזיה של מולקולות העוקב לצד המוח של התרבית.

יתר על כן, אסוף כמויות מתאימות של מדיה מהדם ומצד המוח בנקודות הזמן הרצויות. החלף את שני הצדדים במדיה כדי לשמור על נפח המדיה.

לבסוף, השתמש בקורא צלחות מרובה בארות כדי למדוד את הקרינה של המדיה שנאספה כדי להעריך את החדירות של מודל BBB.

עוצמת הקרינה הנמוכה יותר מצד המוח מרמזת על חדירות נמוכה יותר של המחסום התאי.

ראשית, אספו 100 מיקרוליטר של המדיום הן מצדי הדם והן מצדי המוח של חיקוי ה-BBTB והעבירו כל אחד מהם לצלחת נפרדת בעלת תחתית שטוחה ו-96 בארות ל