בידוד תאי מוח מזחלי דגי זברה: שיטה להשגת נוירונים, מקרופאגים ותאי מיקרוגליה שלמים מרקמת המוח של דגי הזברה

מוח דג הזברה מורכב מנוירונים - תאי עצב הממלאים תפקיד בולט בעיבוד מידע. בנוסף, הוא מורכב מאוכלוסייה של תאים חיסוניים תומכים, כולל מקרופאגים ומיקרוגליה, המאכלסים את החלל הבין-עצבי.

כדי לבודד את כל סוגי תאי המוח הללו מדג זברה, ראשית, קחו זחלי דג זברה מורדמים בצלחת פטרי המכילה מדיה מתאימה.

דמיינו את דג הזברה תחת סטריאומיקרוסקופ והעבירו את ראשי הזחלים מעל שק החלמון כדי לשמור על המוח שלם.

העבירו את הראשים הכרותים להומוגנייזר מלא במדיה מקוררת מראש, המונחת על קרח. טמפרטורה נמוכה מסייעת במניעת פירוק תאי המוח.

בעזרת עלי, הומוגניזציה של רקמת המוח של דג הזברה. הומוגניזציה מפרקת את המטריצה החוץ-תאית ויוזמת דיסוציאציה של נוירונים, מקרופאגים ומיקרוגליה מרקמת המוח.

שלב זה גם מפריד בין מיאלין - שכבת בידוד עשירה בשומנים - לבין נוירונים.

העבירו את ההומוגנאט דרך מסננת כדי ללכוד גושי תאים גדולים.

צנטריפוגה את המסנן כדי לגלול את התאים ושברי מעטפת המיאלין. השליכו את הסופרנטנט המכיל פסולת.

השעו מחדש את הגלולה במדיום שיפוע צפיפות מתאים וכסו אותה עם מאגר.

סובב את הצינור במהירות נמוכה. שברי המיאלין הבהירים יותר יוצרים פס מובהק בממשק של אמצעי שיפוע המאגר והצפיפות, בעוד שהתאים הצפופים יותר מתיישבים בתחתית.

שאפו את השכבות העליונות והשעו מחדש את תאי המוח במדיה טרייה לשימוש נוסף.

הוסף 1.5 מיליליטר של טריקאין 15 מ