בידוד תאי מיקרוגליה על ידי צביעה חיסונית מיון תאים מצומדים: שיטת צביעה חיסונית לבידוד תאי מיקרוגליה מתאי מוח של דגי זברה באמצעות מיון תאים מופעלים פלואורסצנטיים

בתנאים פתולוגיים, מיקרוגליה מופעלת - מקרופאגים מיוחדים במוח - מסייעים בחיסול פתוגנים ופסולת תאים. מיקרוגליה זו מבטאת קולטנים ייחודיים המבדילים אותם ממקרופאגים אחרים.

כדי לבודד מיקרוגליה, התחל בתרבית תאי מוח שמקורה בדג זברה מהונדס, המבטא מולקולות פלואורסצנטיות ספציפיות בסוגי תאים שונים.

התרבית מכילה תערובת של נוירונים - המבטאים פלואורסצנטיות אדומה, מקרופאגים - המבטאים פלואורסצנטיות ירוקה ומיקרוגליה שאינה פלואורסצנטית.

כעת, הוסף מגיב חוסם ודגר את התרבות בתסיסה לסירוגין. המגיב החוסם נקשר לאתרים הלא ספציפיים בתאים ומפחית את אות הרקע.

לאחר מכן, הוסיפו נוגדנים ראשוניים ודגרו. נוגדנים אלה נקשרים לקולטנים ספציפיים המתבטאים על פני המיקרוגליה.

צנטריפוגה את התרבית והסר את הסופרנטנט המכיל נוגדנים לא קשורים. השעו מחדש את כדור התא במדיום טרי.

לאחר מכן, הוסף נוגדנים משניים מצומדים בצבע פלואורסצנטי ודגירה. נוגדנים אלה נקשרים לנוגדנים הראשוניים ומעניקים צבע אדום לקומפלקס נוגדנים מיקרוגליה.

צנטריפוגה של התרבית והסרת נוגדנים לא קשורים. השעו מחדש את הגלולה במדיום רענן.

סנן את התאים כדי להסיר פסולת.

באמצעות ממיין תאים מופעל פלואורסצנטי או FACS, מיין את אוכלוסיית תאי המיקרוגליה על סמך גודל התא והפלואורסצנטיות שלהם.

ניתן להשתמש במיקרוגליה המבודדת ליישומים נוספים.

כדי לפגוע במיקרוגליה חיסונית, השתמש ב-0.3