יצירת תאי גזע עצביים מושרים (iNSCs) מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMNCs): הליך מבוסס וירוס סנדאי לתכנות מחדש של PBMNCs לתאי גזע מושרים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:05 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לתכנת מחדש תאים סומטיים לתאי גזע עצביים מושרים או iNSCs - תאי גזע בעלי יכולת חידוש עצמי והתמיינות גבוהה, התחל בתרבית תאים חד-גרעיניים בדם היקפי במדיום נטול סרום כדי להרחיב אריתרובלסטים.
לאחר מכן, פיפטה את מתלה האריתרובלסטים לצלחת תרבות. טפל בתאים עם נגיף סנדאי רקומביננטי או SeV. וירוסים אלה מקודדים תכנות מחדש של גורמי שעתוק. צנטריפוגה כדי לשקוע את התאים ולדגור.
לאחר היתוך SeV לקרום התא המארח, גנום הנגיף עובר שעתוק ואחריו תרגום בציטופלזמה. הביטוי החוץ רחמי של גורמי שעתוק מפעיל את תהליך התכנות מחדש של התא מבלי לשלב את הגנים בגנום המארח.
כעת, צנטריפוגה את התרבית כדי להסיר את הנגיפים. השעו מחדש את התאים המומרים במדיה מתאימה, ואחריה ציפוי. יתר על כן, צנטריפוגה להסרת פסולת תאית. השעו מחדש את התאים במדיית iNSC.
לאחר מכן, זרעו את התאים בצלחת מצופה חלבון. התאים מתחברים לציפוי החלבון בצלחת. השלם את התאים הדבוקים במדיה iNSC בימים לסירוגין. לאחר שבוע של תרבות, החלף את המדיה המבוזבזת במדיה חדשה של iNSC מדי יום.
גורמי הגדילה והמרכיבים הכימיים במדיה שומרים על התחדשות עצמית ותומכים בפלוריפוטנטיות של תת-קבוצה של תאים מותמרים, ומתכנתים אותם מחדש לחלוטין ל-iNSCs. עם הזמן, התאים מתחילים ליצור מושבות iNSC. בחר את המושבות הרצויות לתרבית.
ביום 0, אספו את התאים במדיום MNC והעבירו לצינור חרוטי של 15 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים