בידוד DNA ללא תאים במחזור הדם (cfDNA): הליך קרום מבוסס סיליקה לחילוץ cfDNA מפלזמת הדם של חולי סרטן
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:42 דק׳ • July 8th, 2025
DNA נטול תאים במחזור או cfDNA הם מקטעי DNA קצרים המשתחררים בעיקר על ידי תאים סרטניים העוברים אפופטוזיס. cfDNA הם סמנים ביולוגיים מבטיחים לסרטן וניתן לבודד אותם מנוזלי גוף כגון פלזמה.
כדי לבודד cfDNA, ראשית, קבל דגימת פלזמה מחולה סרטן. לאחר מכן, טפל בפלזמה עם מאגר ליזה המכיל חלבון K, מלחים כאוטרופיים ו-RNA נשא. המלחים הכאוטרופיים מנטרלים חלבונים, ומשחררים cfDNA קשורים מחלבונים. פרוטאינאז K מנטרל נוקלאזות, ובכך ממזער את פירוק cfDNA.
לאחר מכן, הוסף את מאגר הכריכה הרצוי לדגימה. הרכיבו עמוד ספין המכיל מטריצת סיליקה פאזה מוצקה על מנגנון הוואקום. טען את הדוגמה בעמודה. החל ואקום כדי להעביר את הדגימה דרך קרום הסיליקה.
ה-RNA הנשא נקשר באופן לא ספציפי לדפנות הצינור. קשירה לא ספציפית זו יחד עם נוכחות מלחים במאגר מקלה על קשירת cfDNA לקרום הסיליקה, ומגבירה את ההתאוששות של cfDNAs. החלבונים ומזהמים אחרים אינם נשמרים על הממברנה.
כעת, הנח את עמוד הסיבוב על צינור איסוף. צנטריפוגה להסרת שאריות ליזאט. הוסף מאגר כביסה וצנטריפוגה מתאימים כדי להסיר את המלחים וכל המזהמים שנותרו מהעמוד. לבסוף, העבירו את העמודה לצינור איסוף טרי והוסיפו מאגר פליטה מתאים. צנטריפוגה כדי לסלק את חומצות הגרעין כולל cfDNA לתוך הצינור.
כדי לבודד DNA נטול תאים במחזור מדגימת פלזמה של מטופל, הוסף 100 מיקרוליטר של פרוטאינאז K ו-800 מיק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים