תגובת שרשרת פולימראז דיגיטלית טיפתית: שיטה ליצירת תגובות PCR ננו-טיפתיות לאיתור מוטציות סרטניות נדירות

תגובת שרשרת פולימראז דיגיטלית טיפתית או טכנולוגיית dPCR מחלקת מגיבים של תגובת PCR בודדת למיליוני תגובות PCR ננו-טיפות. חלוקה מסה זו ואחריה הגברה מגלה כמות זעירה של DNA מוטנטי על רקע גדול של DNA מסוג פראי, מה שמאפשר גילוי מוקדם של סרטן.

כדי להתחיל, תערובת מאסטר dPCR לשאיבה המכילה אוליגונוקלאוטידים בעלי תווית פלואורסצנטית יחד עם ריאגנטים אחרים של PCR ושמן מייצב טיפות. הוסף את תערובת המאסטר הזו ישירות לתחתית כל באר בצינור רצועת PCR כדי למנוע בועות אוויר. לאחר מכן, הוסיפו דגימות DNA לתערובת התגובה ופיפטה מספר פעמים כדי לערבב.

כעת, העבירו את כל תערובת התגובה לשבב מיוחד של מכשיר ליצירת טיפות. התקן צינור רצועת PCR טרי על המכשיר המייצר טיפות. מחולל הטיפות משלב את הדגימה והשמן ליצירת ננו-טיפות נפרדות עם אזור עטוף המונע זיהום צולב בין הטיפות.

לאחר השלמת הטיפה, העבר את צינור רצועת ה-PCR למחזור תרמי כדי להגביר את ה-DNA של המטרה. לאחר מכן, טען את מוצר ה-PCR לקורא טיפות המכיל גלאי פלואורסצנטי, הסופר את הטיפות החיוביות והשליליות הפלואורסצנטיות. ניתן להשתמש במספר הטיפות החיוביות כדי לחשב את ריכוז ה-DNA היעד בדגימה.

לפני שתתחיל בהליך ה-PCR הדיגיטלי של הטיפות, נקה את חלל הספסל והציוד עם 10% אקונומיקה ו-70% אתנול ומערבולת בעדינות וצנטריפוגה קצרה את כל הריאגנטים למעט השמן המייצב טיפות. ודא כי בלון גז