כריתת גידול מונחה פלואורסצנטיות והשתלת פיגום זרעי MSC במודל מורין: הליך כירורגי להעברת תאי גזע מזנכימליים טיפוליים לחלל כריתת גידול במוח במודל עכבר

ניתן להנדס גנטית תאי גזע מזנכימליים או MSCs כדי לבטא ליגנד הגורם לאפופטוזיס הקשור לגורם נמק גידול או TRAIL, אשר נקשר לקולטנים ספציפיים בתאי גידול הגורמים לאפופטוזיס.

כדי להעביר את ה-MSCs הללו למודל עכבר נושא גידול, ראשית, הכינו פיגום ביופולימר זרעי MSC המבטא TRAIL. לאחר מכן, אבטח עכבר מורדם הנושא גידול מוח עם תווית פלואורסצנטית על מסגרת סטריאוטקטית. לעכבר יש חלון גולגולת מוגדר מראש לגישה למוח.

שמרו על טמפרטורת הגוף של העכבר בעזרת כרית חימום. עקר את אתר הניתוח ובצע חתך בקו האמצע בקרקפת. הסר את השומן התת-עורי כדי לחשוף את חלון הגולגולת. מקלפים את הדורה מאטר מהחלון, חושפים את הרקמה הפרנכימלית והגידול הבסיסיים.

כעת, תחת סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמיינו את הגידול הפלואורסצנטי. שאפו את רקמת הגידול הפלואורסצנטי מהמוח. שטפו עם מי מלח כדי להחזיר את ה-pH הפיזיולוגי. השתל את הפיגום עם זרעי MSC בחלל הכריתה. מרחו חומר המוסטטי מתאים כדי לאבטח את הפיגום במקומו. סגור את החתך ואפשר לעכבר להתאושש.

לאחר ההשתלה, תאי הגידול בתוך מוקדי הגידול הנותרים מפרישים גורמים מסיסים, המקלים על נדידת MSCs מהפיגום לעבר תאי הגידול. חלבוני ה-TRAIL המופרשים על ידי MSCs נקשרים לקולטנים ספציפיים בתאי הגידול, וגורמים למוות של תאי אפופטוט.

התחל בהנחת המסגרת הסטריאוטקסית על הבמה של סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי המנתח. לאחר מכן, אבטח את העכבר המורדם על המסגרת הסטריאוטקסית עם אספקת הרדמה בשאיפה רציפה באמצעות מתאם חרוט אף איזופלורן. שמרו על טמפרטורת הגוף בעזרת כרית חימום. יש למרוח משחה עיניים על העיניים למניעת ייבוש הקרנית. לאחר מכן, יש לעקר את מקום החתך בקרקפת עם סדרה של שלושה מגבוני אלכוהול ושלושה מגבוני בטדין.

בצע את בדיקת רפלקס צביטת הבוהן בכל איבר ואשר תגובה שלילית כדי להבטיח הרדמה נכונה. בעזרת מלקחיים, צבטו והרימו בעדינות את הקרקפת. לאחר ביצוע חתך ליניארי בקו האמצע עם מספריים כירורגיים, יש להשקות את מקום החתך עם PBS ולהסיר שומן תת עורי בעזרת מוליך קצה כותנה בתנועת צחצוח סיבובית.

סדרו את העור כך שחלון הגולגולת שהוקם בעבר נראה במלואו. השתמש במחט בגודל 18 כדי לנקב בעדינות את הדורה ממש בפנים לגבולות חלון הגולגולת. חזור על הפעולה עד שהחתך עוקב במלואו אחר פנים החלון. הסר את הדורה על ידי קילוף באמצעות מלקחיים עדינים, וחושף את הפרנכימה והגידול הבסיסיים.

לאחר מכן, עמעם את אורות החדר והפעל את מצב הקרינה של הסטריאומיקרוסקופ. אתר את הגידול U87 mCherry ו-Firefly המבטא לוציפראז. טען קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר לקצה הצינור של משאבת ואקום. לאחר מכן, הפעל את משאבת הוואקום. כרתו את הגידול על ידי שאיבת הרקמה הפלואורסצנטית בעדינות עד שלא יישאר אות. כדי לשלוט בדימום, יש להשקות עם PBS קר ולהפעיל לחץ יציב עם אפליקטור עם קצה כותנה.

השתמש בשילוב של מי מלח, לחץ יציב עם אפליקטור כותנה ו/או חומר המוסטטי, כגון SURGICEL, כדי לעצור את הדימום לפני השתלת הפיגום. אם לא נשלט כראוי, עלולה להיווצר המטומה שעלולה להיות מסוכנת. לאחר הכריתה, כבה את משאבת הוואקום והשליך את קצה הפיפטה. כבה את הקרינה והאורות בחדר נדלקים בחזרה. מיד לפני ההשתלה, טבלו לאט פיגום PLA עם זרעי MSC ב-PBS כדי להסיר מדיה לא רצויה ורכיבים נלווים. השתל את הפיגום בחלל הכריתה.

במידת הצורך, הוסף 1 מיקרוליטר פיברינוגן, ואחריו 1 מיקרוליטר תרומבין כדי לאבטח את הפיגום במקומו. לאחר הסרת הדורה ודש העצם מחלון הגולגולת כבר הושלך, אטום את הפצע על ידי סגירת העור ומריחת דבק כירורגי. הסר את החיה מההרדמה בשאיפה ואפשר לה להתאושש על משטח מחומם.