אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:39 דק׳ • July 8th, 2025
הדמיית סרטן מוח in vivo כוללת הזרקת תאים סרטניים בעלי תווית פלואורסצנטית למוח העכבר כדי לצפות בהתפתחות הגידול. לתיוג פלואורסצנטי, דגרו תאי גליומה עם חלקיקי לנטי-וירוס. הווקטור הלנטי-ויראלי נושא את הגן לחלבון פלואורסצנטי אינפרא אדום, iRFP.
הנגיף נקשר לפני השטח של תא הגליומה ומשחרר RNA לתוך התא. אנזימים תאיים ממירים את ה-RNA הנגיפי ל-DNA דו-גדילי, המשתלב בגנום התא ומאפשר ביטוי iRFP. מקסימום העירור והפליטה של iRFP נמצא באזור קרוב לאינפרא אדום שבו לרקמות יש ספיגה ופיזור מינימליים. זה מאפשר הדמיה מדויקת של רקמות עמוקות.
לאחר מכן, הסר את המדיום המושקע והוסף טריפסין. טריפסין, אנזים פרוטאז, מעכל את חלבוני ההדבקה, ומנתק את התאים משטח הבקבוק. פיפטה שוב ושוב כדי להפריד בין התאים הבודדים. אוספים את תרחיף התאים לצינור ולצנטריפוגה. כעת, הוסף מאגר מתאים כדי להשעות מחדש את הגלולה.
הוצא את תרחיף התאים לצינורות ציטומטריית זרימה וצבוע את התאים בצבע פלואורסצנטי, DAPI. DAPI צובע את גרעין התאים המתים בכחול בוהק, ומבדיל אותם מתאים חיים. באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות או FACS, מיין את התאים החיוביים ל-iRFP חיים מאוכלוסיות תאים אחרות על סמך הקרינה שלהם. התאים המבודדים יכולים לשמש להזרקה לעכברים לצורך הדמיית גידול.
התחל בזריעה 1 כפול 10 עד תאי הגליובלסטומה השישי ב -5 מיליליטר מדיום לתוך צלחת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים