JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:39 דק' • July 8th, 2025
הדמיית סרטן מוח in vivo כוללת הזרקת תאים סרטניים בעלי תווית פלואורסצנטית למוח העכבר כדי לצפות בהתפתחות הגידול. לתיוג פלואורסצנטי, דגרו תאי גליומה עם חלקיקי לנטי-וירוס. הווקטור הלנטי-ויראלי נושא את הגן לחלבון פלואורסצנטי אינפרא אדום, iRFP.
הנגיף נקשר לפני השטח של תא הגליומה ומשחרר RNA לתוך התא. אנזימים תאיים ממירים את ה-RNA הנגיפי ל-DNA דו-גדילי, המשתלב בגנום התא ומאפשר ביטוי iRFP. מקסימום העירור והפליטה של iRFP נמצא באזור קרוב לאינפרא אדום שבו לרקמות יש ספיגה ופיזור מינימליים. זה מאפשר הדמיה מדויקת של רקמות עמוקות.
לאחר מכן, הסר את המדיום המושקע והוסף טריפסין. טריפסין, אנזים פרוטאז, מעכל את חלבוני ההדבקה, ומנתק את התאים משטח הבקבוק. פיפטה שוב ושוב כדי להפריד בין התאים הבודדים. אוספים את תרחיף התאים לצינור ולצנטריפוגה. כעת, הוסף מאגר מתאים כדי להשעות מחדש את הגלולה.
הוצא את תרחיף התאים לצינורות ציטומטריית זרימה וצבוע את התאים בצבע פלואורסצנטי, DAPI. DAPI צובע את גרעין התאים המתים בכחול בוהק, ומבדיל אותם מתאים חיים. באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות או FACS, מיין את התאים החיוביים ל-iRFP חיים מאוכלוסיות תאים אחרות על סמך הקרינה שלהם. התאים המבודדים יכולים לשמש להזרקה לעכברים לצורך הדמיית גידול.
התחל בזריעה 1 כפול 10 עד תאי הגליובלסטומה השישי ב -5 מיליליטר מדיום לתוך צלחת של 10 סנטימטר לדגירה של 24 שעות בחממת תרבית תאים. למחרת בבוקר, התמרו את התאים עם נגיף הלנטי המבטא חלבון פלואורסצנטי מתאים מעניין בריבוי זיהום של 5 והחזירו את התאים לאינקובטור.
לאחר 24 שעות, החלף את הסופרנטנט ב -5 מיליליטר מדיום טרי ודגר את התרבית למשך 48 שעות נוספות. בתום הדגירה, החלף את המדיום ב -3 עד 5 מיליליטר טריפסין למשך 10 עד 15 דקות ב -37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן פיפטינג זהיר כדי לנתק לחלוטין את התאים המנותקים.
אסוף את התאים על ידי צנטריפוגה והשהה מחדש את הגלולה ב -500 מיקרוליטר של תמיסת מיון. פצל את התאים למספר המתאים של צינורות FACS והכניס את התאים עם DAPI להוצאת תאים מתים. לאחר מכן, טען את הצינורות על ציטומטר הזרימה ומיין את התאים החיים לפי ביטוי המבנה הפלואורסצנטי שלהם לצינור חרוטי של 15 מיליליטר המכיל תמיסת מיון טרייה.
לאחר צנטריפוגה, השעו מחדש את התאים החיוביים לבנייה/DAPI שליליים ב-5 מיליליטר של מדיום תרבית וזרעו אותם על צלחת חדשה של 10 סנטימטרים לתרבית שלהם ב-37 מעלות צלזיוס למשך 48 עד 72 שעות. בתום הדגירה, פצלו את התאים לזריעה למספר מנות לניסויים הבאים in vivo.
מאמר זה דן בטכניקות להדמיית סרטן המוח in vivo באמצעות תאי גליומה המסומנים פלואורסצנטית במודלים של עכברים. המתודולוגיה כוללת שימוש בווקטורים לנטיביריאליים כדי לבטא חלבונים פלואורסצנטיים באינפרא-אדום, המאפשרים הדמיה של רקמה עמוקה במהלך התפתחות הגידול.
סימון פלואורסצנטי של תאי גליומה באמצעות וקטורים לנטי-ויראליים מאפשר הדמיה של רקמות עמוקות לצורך מעקב אחר התפתחות הגידול in vivo. גישה זו תומכת בתיקוף של מטרות על ידי אספקת קריאה יציבה וכמותית של התנהגות תאי הגליומה במודלים פרה-קליניים. השיטה מגבירה את רמת הוודאות החיזוית בגילוי תרופות אונקולוגיות, בכך שהיא מאפשרת ניטור לונגיטודי של התערבויות טיפוליות במערכות רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית.
השיטה משתלבת ברצף הגילוי, החל מתיקוף המטרה ועד לבדיקת יעילות פרה-קלינית, על ידי אספקת תאי גליומה בעלי יכולת דימוי.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026