אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:15 דק׳ • July 8th, 2025
תאי גזע של גידול מוח או BTSCs, תת-אוכלוסייה של תאי גידול מוח, יכולים ליזום צמיחה וגרורות, מה שהופך אותם למטרות מבטיחות לטיפול בסרטן. כדי לחקור את השפעת התרופות על נדידת BTSC במבחנה, ראשית, הכינו תרחיפים אחידים של BTSCs במדיה מתאימה. טפל באחת ההשעיות עם התרופה המעניינת.
בינתיים, השג צלחת כימוטקסיס מרובת בארות המורכבת מתוספות קרומיות המפרידות כל באר לתאים עליונים ותחתונים. פיפטה רצתה חלבון מטריצה חוץ-תאית לתאים התחתונים ולתוספות הקרומיות. דגירה כדי להקל על פילמור החלבון.
הוסף חומר בזאלי מתאים המכיל את החומר הכימו-אטרקטיבי הרצוי לתאים התחתונים והניח מעל התוספות הקרומיות. לאחר מכן, זרעו את תרחיף ה-BTSC שטופל בתרופות ולא טופלו לתוך תוספות קרומיות. צלם את הלוח למשך זמן ממושך באמצעות מיקרוסקופ תא חי.
בתרבית, BTSCs נצמדים למטריצת החלבון של התוספת. בתגובה לשיפוע הריכוז הכימו-אטרקטיבי שנוצר בין החדר העליון והתחתון, ה-BTSCs הלא מטופלים נודדים על פני מטריצת החלבון דרך נקבוביות הכנסת הממברנה לתא התחתון.
עם זאת, הטיפול התרופתי משפיע לרעה על הפעילות התפקודית של התאים, ומפחית את נדידת ה-BTSC. כעת, באמצעות תוכנה מתאימה, נתח וכימת את ה-BTSCs שהועברו בחדרים התחתונים. ה-BTSCs הלא מטופלים מציגים נדידה מוגברת, בעוד שה-BTSCs שטופלו בתרופות מראים נדידה מופחתת.
כדי להעריך את ההשפעות של טיפול תרופתי מעניין על הנדידה, ראשית, יש לטפל בתאים בריכוז המתאים של התרופה לתקופת ניסוי מתאימה. כדי להכין את צלחת הכימוטקסיס, יש לצפות שלוש בארות הכנסת ממברנה ושלוש בארות מאגר תחתונות לפי מצב של צלחת כימוטקסיס של 96 בארות עם 75 ו-225 מיקרוליטר של 0.2 מיליגרם למיליליטר קולגן מסוג I, בהתאמה, למשך שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס.
בתום הדגירה יש לשאוב את תמיסת הקולגן מכל באר מבלי לשרוט את ציפוי הקולגן ולשטוף את הבארות פעמיים עם PBS סטרילי. לאחר הכביסה האחרונה, הסר את התוספת מהצלחת והוסף 225 מיקרוליטר של מדיה נטולת גורם גדילה בתוספת 10% FBS לכל באר מאגר תחתונה של צלחת הכימוטקסיס.
לאחר מכן, החזר בעדינות את התוספת העליונה למאגר התחתון בזווית כדי למנוע יצירת בועות והוסף 2.5 פעמים 10 ל-BTSCs השלישיים המנותקים ב-50 מיקרוליטר של מדיה נטולת גורם גדילה לכל באר. חשוב להפריד לחלוטין את ה-BTSCs לתאים בודדים ולספור אותם בזהירות לפני הציפוי כדי למנוע גושי תאים או יותר מדי תאים בתוספת העליונה.
כדי לדמות נדידת BTSC לאורך שיפוע FBS, הנח את הלוח במערכת הדמיה של תאים חיים והגדר את תוכנת ההדמיה האוטומטית לרכוש תמונות מיקרוסקופיות של הלוח כל שעה עד שעתיים למשך עד 72 שעות. לאחר השלמת רכישת התמונה, בחר הגדרת עיבוד חדשה כדי להבדיל את ה-BTSCs מנקבוביות ההכנסה שלהם בצד התחתון של הממברנה, ושנה את הניתוח אם הוא לא מבחין במדויק בין התאים לקרום הרקע לפי הצורך.
כדי לכמת את התאים שנדדו דרך הנקבוביות, אסוף את הנתונים כשטח הפנים של התא בצד התחתון של הממברנה עבור כל אחת משלוש בארות השכפול לכל מצב. לאחר מכן, גרף את נדידת התאים כשטח התאים שנודד במיקרומטרים בריבוע לאורך זמן.