תרבית משותפת של תאי גליובלסטומה על תאי עצב בעלי תבנית: טכניקה לניטור נדידת תאי גליובלסטומה על תאי עצב בהיפוקמפוס חולדה במבחנה

לגליובלסטומה יש תאים דמויי גזע הנודדים לאורך המסלולים האקסונליים של נוירונים מיאליניים כדי לפלוש למקומות מרוחקים במוח. כדי לסכם את הנדידה של תאי גליובלסטומה או GBM על נוירונים במבחנה, התחל בלקיחת כיסוי זכוכית.

הפעל את הכיסוי על ידי טיפול בפלזמת חמצן והכין אותו בחומר פונקציונלי. טיפול זה תומך בגישה נוחה לכימיקלים בשלבים הבאים. הוסף תמיסת PEGylated לכיסוי ודגירה. פתרון זה מצפה את הכיסוי ומונע הידבקות נוירונים במקומות אקראיים.

הוצא פולימר פוטו-יוזם על משטח הכיסוי והתקן אותו בתא ההדמיה. הנח את החדר על הבמה של מיקרוסקופ פלואורסצנטי. ברגע שנכנסים פנימה, תאורת ה-UV מפעילה את מולקולות הפוטו-יוזם באופן מקומי באזורים המיועדים המתאימים למיקרו-דפוסים הצפויים.

מולקולות הפוטו-יוזם המופעלות מבקעות את שכבת ה-PEG הבסיסית, ויוצרות את הדפוס הרצוי. כעת, הוסיפו את תמיסת הלמינין ודגרו. למינין - גליקופרוטאין - מופקד במקומות ספציפיים שבהם שכבת ה-PEG הוסרה. זרעו את המדיה המכילה נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות על הכיסוי.

דגירה כדי לאפשר היצמדות של הנוירונים למערכים המצופים למינין כדי להשיג תלושי כיסוי במיקרו-דפוס נוירונים. הפקידו תרחיף של תאי GBM עם תווית פלואורסצנטית מעל הנוירונים המיקרו-תבניתיים. תמונה כדי לראות את תאי ה-GBM הפלואורסצנטיים נודדים על תאי עצב.

כדי ליצור מצע למיקרו-דפוס, טפל בכיסויי זכוכית עגולים בגודל 18 מילימטר בהפעלת אוויר או פלזמה למשך 5 דקות לפני הנחת הכיסויים במייבש עם 100 מיקרוליטר של 3-אמינופרופיל טריאתוקסילאן למשך שעה. לאחר מכן, דגרו תמיסה של Peg-SVA ב-100 מיליגרם למיליליטר למשך שעה לתצהיר ג'ל. בתום הדגירה מוסיפים למרכז השקופית 3 מיקרוליטר PLPP ו -50 מיקרוליטר אתנול מוחלט ומחכים עד שיתייבש לחלוטין.

עבור מיקרו-דפוס שקופיות זכוכית, הרכיב את הכיסוי בתא לודין והנח את החדר על הבמה של מיקרוסקופ המצויד במערכת פוקוס אוטומטי. לאחר ההדמיה, טען את התמונות המיקרו-דפוסיות לתוכנה. לאחר רצף אוטומטי של תאורת UV, השתמש בפיפטה כדי לשטוף את ה-PLPP מהחלקת הכיסוי באופן נרחב עם PBS. לאחר מכן, דגרו את הכיסוי עם 50 מיקרוגרם למיליליטר למינין למשך 30 דקות, ולאחר מכן שטיפה נוספת עם PBS כפי שהודגם.

כדי להקים תרבית נוירונים בהיפוקמפוס של חולדה עוברית על הכיסויים המיקרו-דפוסיים, לאחר הכביסה האחרונה, יש להרטיב את שקופיות הזכוכית עם מדיום תרבית תאים עצביים. זרע 5 פעמים 10 לנוירונים ההיפוקמפוס הרביעי של החולדה תלויים בתווך נוירו-בסיסי מועשר ב-3% סרום סוס לסנטימטר רבוע על כל כיסוי מעוצב לדגירה של 24 שעות בחממה של 5% פחמן דו חמצני ב-37 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה פירקה תאי גליובלסטומה למשך 5 דקות במהירות של 1,000 סל"ד והשעתה מחדש את הגלולה במדיום תרבית תאי גליובלסטומה. לאחר מכן, הפקידו 1 כפול 10 לתאי ה-GBM השלישיים מעל תאי העצב המיקרו-תבניתיים.