JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:21 דק' • July 8th, 2025
במערכת העצבים המרכזית, פריציטים הם תאים רב תפקודיים העוטפים את תאי האנדותל, היוצרים את הציפוי התאי הפנימי של הנימים. פריציטים עוזרים לווסת את זרימת הדם ולשמור על הומאוסטזיס במוח.
כדי לבודד פריציטים, התחל בלקיחת נימי מוח בקר קפואים בבקבוקון. לאחר ההפשרה, העבירו את התכולה לצינור המכיל את המדיה הרצויה. צנטריפוגה לכדור הנימים. הסר את החומר המקפיא המכיל נוזל על. השעו מחדש את הגלולה הנימים במדיה וזרעו את התרחיף לבקבוק מצופה חלבון מטריצה חוץ-תאית.
דגירה כדי לאפשר לנימים להיצמד לציפוי בבקבוק. החלף את המדיה במדיה המכילה הפרין. בתרבית, ציפוי חלבון המטריצה החוץ-תאית מעודד פריציטים לנדוד הרחק משברי הנימים ולהתרבות, בעוד שהפרין ממריץ את נדידת תאי האנדותל.
החלף את המדיה המבוזבזת במדיה המכילה הפרין. עם הזמן, פריציטים מקרינים תהליכים מוארכים הנצמדים חזק לבקבוק. עם שטח מצע מוגבל, תאי אנדותל מתרבים ויוצרים שכבה חד-שכבתית מעוכבת מגע. לאחר השגת צפיפות פריציטים מתאימה, הסר את המדיה ושטוף את הבקבוק עם חיץ.
השתמש בטריפסין-EDTA כדי לנתק את תאי האנדותל הקשורים באופן רופף מהבקבוק. לאחר מכן, הוסף מדיה כדי לנטרל את פעילות טריפסין-EDTA. שטפו עם מדיה שוב ושוב כדי להסיר את תאי האנדותל המנותקים. הוסף מדיה וודא שהפריציטים יישארו מחוברים לבקבוק. דגרו על התרבות המועשרת בפריציטים כדי להתרבות.
התחל בהפשרת בקבוקון אחד של נימים באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הפשרת הנימים, העבירו אותם לצינור צנטריפוגה עם 30 מיליליטר של DMEM-comp וצנטריפוגה למשך 5 דקות ב-500 x גרם. לאחר מכן, הוציאו את המדיום מהצינור והשעו מחדש את הגלולה ב-10 מיליליטר של DMEM-comp טרי. העבירו את המתלה לבקבוק מצופה T75 ואפשרו לנימים להיצמד לתחתית למשך 4 עד 6 שעות באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס המסופק עם 10% פחמן דו חמצני. לאחר הדגירה, בדוק את הבקבוק תחת מיקרוסקופ אור.
כעת יש לחבר שברי נימים לתחתית הבקבוק. ביום הרביעי, לאחר זריעת הנימים, בדקו אותם במיקרוסקופ כדי לוודא שהם מתלכדים בכ-60% עד 70%. שאפו את המדיום ושטפו בעדינות את התאים בעזרת PBS. הוסיפו 2 מיליליטר של טריפסין-EDTA מופשר והשאירו את הבקבוק בחממה למשך 1 עד 3 דקות, הוציאו את הבקבוק לעתים קרובות והתבוננו בניתוק התאים במיקרוסקופ. כאשר תאי האנדותל מתחילים להתעגל, הקש בעדינות על הבקבוק כדי לנתק אותם.
כאשר התאים מתנתקים, הפסק את הטריפסיניזציה על ידי הוספת 10 מיליליטר של DMEM-comp לבקבוק. שטפו את הבקבוק כמה פעמים עם המדיום ושאבו את תרחיף תאי האנדותל, שכעת יכול לשמש למטרות אחרות. הוסף 10 מיליליטר של DMEM-comp לבקבוק ובדוק אותו תחת מיקרוסקופ האור כדי לוודא שהפריציטים עדיין קיימים ומחוברים לתחתית. לאחר מכן, החזירו את הבקבוק לאינקובטור כדי לאפשר לתרבות המועשרת בפריציטים לצמוח.
מאמר זה דן בבידוד ובתרבית של פריציטים (pericytes) מנימיות של מוח בקר. פריציטים ממלאים תפקיד מכריע בויסות זרימת הדם ובשמירה על ההומאוסטזיס של המוח.
בידוד ותרבית אמינים של פריסייטים (pericytes) ראשוניים מהמוח ללא זיהום מאנדותל מענים לצורך קריטי במודלים in vitro רלוונטיים למחלות במחקר נוירו-וסקולרי. יכולת זו מגבירה את הביטחון החזוי בשלבי הגילוי המוקדמים ובתיקוף מטרות לפיתוח תרופות למערכת העצבים המרכזית (CNS). השיטה תומכת ברצף טרנסלציונלי על ידי מתן אפשרות למחקרים מכניסטיים על תפקוד הפריסייטים ועל אינטראקציות נוירו-וסקולריות.
שיטת בידוד פריציטים זו מתאימה לממשק שבין שלבי הגילוי המוקדמים לפיתוח מודלים פרה-קליניים, ומספקת בסיס לסריקות המשך ולמחקרים מכניסטיים.
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
סרטונים קשורים
0 צפיות
עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026