בידוד נימי מוח ממוח האדם: שיטה אופטימלית לחילוץ נימי מוח מרקמת מוח אנושית

נימי המוח הם מרכיב חיוני במחסום הדם-מוח - מחסום חדיר למחצה המאפשר תנועה סלקטיבית של מומסים בין הדם למוח. כדי לבודד נימים מוחיים, התחל עם רקמת מוח אנושית טרייה. הסר את קרומי המוח וקוצץ את החומר הלבן.

טחנו את רקמת המוח לרסיסים קטנים יותר. מעבירים את השברים להומוגניזטור המכיל חיץ והומוגניזציה מתאימים. הומוגניזציה מפרקת את הרקמות, ומשחררת נימים ופסולת רקמות לתמיסה.

העבירו את ההומוגנאט לצינור טרי והוסיפו נפח אופטימלי של מדיום שיפוע צפיפות מתאים. צנטריפוגה התמיסה לכדור הנימים. מדיום שיפוע צפיפות רב מדי או מעט מדי מביא לתשואה נימית נמוכה. הסר את ה-supernatant.

השעו מחדש את הגלולה באלבומין בסרום בקר או במאגר בתוספת BSA. BSA מייצב אנזימי עיכול ושומר על השלמות המבנית של נימים. לאחר מכן, סנן את התמיסה עם פילטר מתאים להסרת כלים גדולים ופסולת רקמות.

לאחר מכן, העבירו את המסנן דרך מסנן רשת קטן יותר. מסנן זה שומר על נימי המוח ומאפשר לפסולת קטנה יותר ולתאי דם אדומים לעבור דרכם. לאחר מכן, הפוך את המסנן ושטוף את הנימים בצינור טרי עם מאגר בתוספת BSA.

צנטריפוגה את התמיסה והסר את הסופרנטנט. השעו מחדש את הנימים הטהורים במאגר ואחסנו אותם לשימוש נוסף.

כדי להתחיל בהליך זה, תעד את משקל רקמת המוח האנושית, שאמור להיות כ -10 גרם. מתחת למיקרוסקופ, הסר בזהירות את כל קרומי המוח בעזרת מלקחיים, והשתמש באזמל כדי לחתו