JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:40 דק' • July 8th, 2025
מחסום הדם-מוח או BBB מורכב מתאי אנדותל מסודרים היטב המחוברים דרך צמתים הדוקים. זה יוצר אטם קומפקטי המגביל את תנועת המולקולות למוח. כדי לחלחל ל-BBB, הכינו עכבר מורדם על ידי קיבועו במצב שכיבה על יחידה סטריאוטקטית.
לאחר מכן, הכנס קטטר לווריד הזנב ושטוף אותו בתמיסה נוגדת קרישה כדי למנוע קרישת דם. קח השעיה של מיקרו-בועות - מיקרוספירות של גז סגורות בתוך שכבת שומנים. הזרקו את המיקרו-בועות לווריד הזנב הרוחבי. המיקרו-בועות האלה נכנסות לזרם הדם, ובסופו של דבר מגיעות למוח.
לאחר מכן, זהו את מיקום המוח ומרחו ג'ל אולטרסאונד על הנקודה המתאימה בראש להולכה טובה יותר של גלים. השתל מתמר אולטרסאונד על האזור המיועד בראש העכבר. השתמש במתמר כדי להחיל גלי אולטרסאונד חזקים וממוקדים.
בשל הלחץ האקוסטי מגלי אולטרסאונד, מיקרו-בועות מתרחבות ומתכווצות במהירות מספר פעמים. תנודות אלו גורמות לסונופרמציה - הפרעה בצמתים ההדוקים של האנדותל - ויוצרות פתחים מקומיים ב-BBB. פתחים אלה מקלים על העברת מיקרו-בועות למוח.
לבסוף, יש להזריק את התמיסה המכילה צבע לתוך כלי הדם. מולקולות הצבע יוצאות מכלי הדם דרך הפתחים החולפים ב-BBB. נוכחות צבע במוח העכבר מעידה על סונופורציה מוצלחת.
למתן מיקרו-בועות לפתיחת BBB, הכנס קטטר וריד זנב בגודל 26 עד 30 ושטוף את הווריד בנפח קטן של תמיסת הפרין. אבטח את הקטטר עם סרט טישו כדי למנוע ניתוק. אם הצנתור הצליח, מלאו את הקטטר בתמיסת הפרין כדי למנוע קרישת דם.
הנח את החיה על הפלטפורמה הסטריאוטקטית המווסתת את הטמפרטורה כדי למנוע היפותרמיה. תקן את ראש החיה באמצעות מוט נשיכה ומוטות אוזניים והדביק את הזנב והצנתר לפלטפורמה. תקן את גוף העכבר בעזרת רצועה.
מקם את הפלטפורמה הסטריאוטקטית עם העכבר המותקן בשיטת ההדמיה וצלם תמונות של החיה. קבע אם החיה ממוקמת נכון על הרציף. סמן את מיקום החיה באמצעות סמני הנאמנות הרב-מודאליים בשילוב עם צינור עיבוד התמונה בהתאם לנקודת המיקוד של המתמר. קבע את אזור המטרה על ידי הצבת מתאר מוחי מעל תמונת הרנטגן הנרכשת, או על ידי שימוש בתמונות BLI כדי לקבוע את מרכז הגידול.
לפני מיקום המתמר, הגן על הנחיריים והפה של החיה באמצעות סרט כדי למנוע מג'ל אולטרסאונד להפריע לנשימה. מרחו ג'ל אולטרסאונד על גבי ראש העכבר להולכת קול תקינה. הקלט קוויטציה של מיקרו-בועות עם הידרופון המחט, הממוקם בסביבה הישירה של העצם העורפית.
בהתבסס על ערכי הכיול, הנח את המתמר למיקום הנכון מעל החיה. החילו הגדרות מוגדרות מראש על כל המכשירים המחוברים כדי להתמקד באזור המוח המעניין. לאחר הצבת המתמר במיקום הנכון, ממיסים והפעל את המיקרו-בועות כמתואר על ידי היצרן.
לפני הזרקת מיקרו-בועות, שטוף את קטטר וריד הזנב במי מלח כדי לאשר גישה לווריד הזנב. התחל את מסלול הסוניקציה והזריק בו זמנית את המיקרו-בועות. במקביל, הידרופון המחט יזהה ויאמת קוויטציה של מיקרו-בועות בזמן אמת. אם תרצה, יש לתת חומר ניגוד תוך-וסקולרי או תרופה לאחר סונופורציה. עקוב אחר החיה עד לנקודת זמן שנקבעה מראש.