JoVE Encyclopedia of Experiments
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:11 דק' • July 8th, 2025
פלישה פרינוירולית היא תופעה גרורתית נדירה שבה תאים סרטניים שולחים גרורות הרחק ממקום המוצא כדי לפלוש לחלל הפרי-עצבי בתוך העצבים. המיקרו-סביבה העצבית מספקת סביבה מתאימה לצמיחה והתפשטות של סרטן.
כדי לדמות פלישה פרינוירולית in vivo, הכינו עכבר מורדם במצב שכיבה. בצע חתך קטן ומקביל מתחת לעצם הירך - עצם הירך. הפרד את שרירי הירך כדי לחשוף את העצב הסיאטי הבסיסי - העצב הגדול והנגיש ביותר בגוף.
העצב הסיאטי מקורו בעמוד השדרה התחתון ועובר דרך שרירי האגן לכל רגל. הוא מעביר אותות לתנועה מתואמת של הגפיים התחתונות. לאחר מכן, הסר את השרירים שמסביב מהעצב ומשוך אותו החוצה באמצעות מרית מעוקרת לתמיכה בהזרקה.
כעת, קחו מזרק מלא בתרחיף התאים הסרטניים והזריקו אותו במקביל לעצב. בליטה גלויה בעצב מאשרת הזרקה מוצלחת, בעוד שכל דליפה סביב מקום ההזרקה מעידה על ניסיון כושל. בקצרה, אפשר לתאים להתייצב בתוך העצב.
לאחר מכן, משוך בעדינות את המחט ומקם מחדש את השרירים. לאחר מכן, תפר את החתך. אפשר לעכבר להתאושש. בסופו של דבר, תאי הסרטן מתחילים לנדוד מאתר ההזרקה לכיוון חוט השדרה, מה שמאשר פלישה פרינוירולית.
ביום שלפני הניתוח, הסר את הפרווה לאורך עצם הירך בצד הגבי של עכברי C57BL/6J זכר או נקבה בני 8 שבועות עם קוצץ כירורגי או חומר כימי להסרת שיער. ביום הניתוח יש לחטא את הבמה, להרדים את העכברים באמצעות איזופלורן 2% בתא אינדוקציה, ולמרוח משחה וטרינרית על העיניים למניעת יובש בהרדמה.
הזרקו כמות מתאימה למשקל של משכך כאבים תת עורי והעבירו עכבר לקונוס אף באזור הניתוח. תמיכה בחום ניתנת לאורך כל ההליך הכירורגי. הנח את העכבר המורדם על צד הגחון שלו ואבטח בעדינות כל איבר עם סרט היפואלרגני כדי ליצור מתח קל בגפה שיש להזריק.
נקה את מקום ההזרקה בעזרת ספוגית בטאדין, ואז שוב עם 70% אלכוהול. חזור על תהליך זה פעמיים נוספות וודא שלא נשאר שיער פזור בשדה הניתוח. כשלב אחרון, יש למרוח תמיסת בטדין על אזור הניתוח. לאחר לבישת כפפות סטריליות והנחת הווילון הסטרילי, השתמש בכלי סטרילי ייעודי כדי למרוח צביטה בבוהן לפני ביצוע החתך מתחת לווילון.
לאחר מכן, השתמש במספריים קטנים סטריליים כדי לבצע חתך של 1 סנטימטר כ -2 מילימטרים מתחת לעצם הירך ובמקביל לה. משוך את העור בעזרת מלקחיים לרוחב כדי לחשוף את השרירים שמתחת. הפרד את שרירי העכוז המקסימלי והשריר הדו-ראשי לאורך מישור פאסיאלי וחשוף את העצב הסיאטי שמתחתיו. שחרר את העצב מהשרירים שמסביב באמצעות דיסקציה קהה.
שאב 3 מיקרוליטר של תאים סרטניים מהגלולה למזרק סטרילי של 10 מיקרוליטר. הנח מרית מתכת קטנה מתחת לעצב בנקודת ההזרקה לתמיכה. תוך כדי הדמיה במיקרוסקופ הניתוח, שמור את המחט במקביל לעצב והכנס אותה לעצב. היזהר לא לנקב דרך החלק האחורי של העצב.
הזרקו לאט את התאים לעצב במשך 5 שניות. היווצרות נורה באזור ההזרקה מעידה על הזרקה טובה. השאר את המחט במקומה למשך 3 שניות כדי למזער את הזרימה החוזרת לפני הסרת המחט בעדינות. הזרקה נכונה של תאי הסרטן בעצב הסיאטי היא קריטית. אם התאים מוזרקים מחוץ לעצב, עקביות הפלישה תיפגע. עם זאת, עם תרגול וניסיון, זה נדיר מאוד.
לאחר ההזרקה יש להחזיר את העצב למקומו המקורי ולכסות את העצב בשרירים שמעליו. טפל בעכברים בשיכוך כאבים מתאים ולאחר מכן סגור את העור עם 5-0 תפרי ניילון. הנח את העכבר לבד בכלוב נקי להשגחה וספק תמיכה בחום במהלך ההתאוששות עד שהוא יחזור להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה חזה