העברה תוך אפית של תאי גזע עצביים טיפוליים (NSCs) במודל מורין: הליך למסירה ממוקדת גידול של NSCs טעונים בנגיף אונקוליטי למודל עכבר נושא גידול במוח

כדי להתחיל, הכניסו תרבית של תאי גזע עצביים או תאי גזע עצביים לתנאי חמצן נמוכים. התניה מוקדמת זו מאפשרת התפשטות משופרת של NSC ויכולות מיקוד גידול. לאחר מכן, קצרו את תאי הגזע העצביים וטפלו בריכוז הרצוי של הנגיף האונקוליטי המשתכפל באופן מותנה. דגירה כדי להעמיס את הנגיפים לתאים.

כעת, צנטריפוגה את התרבית כדי להסיר וירוסים לא קשורים. השעו מחדש את תאי הגזע העצביים העמוסים בנגיף במאגר מתאים. בינתיים, מקמו עכבר מורדם נושא גידול מוח במצב שכיבה לגישה קלה יותר לנחיריים. יש לתת בזהירות את תאי העצב העצביים העמוסים בנגיף לכל נחיר של העכבר, ולחזור על כך במרווחי זמן קצרים.

אפשר לעכבר להתאושש. תאי הגזע העצביים הניתנים דרך האף בחלל האף עוקפים את מחסום הדם-מוח ונכנסים למוח. בתוך המוח, הנגיף משתכפל בתוך התאים המותנים מראש הללו ונודד לאתר הגידול, ומגן על עצמו מפני מערכת החיסון. עם הזמן, החלקיקים הנגיפיים המשתחררים מה-NSCs מתקשרים ונקשרים לקולטנים ספציפיים על פני התא המתבטאים יתר על המידה בתאי הגידול.

לאחר הפנמת הנגיף, נגיפים אלה המשכפלים באופן מותנה משתכפלים באופן מועדף בתאי הגידול וגורמים לליזה של תאים. תאי הגידול הליזים משחררים חלקיקים נגיפיים, המדביקים את תאי הגידול שמסביב, מה שמוביל למפל של זיהום וליזיס תאי גידול. ליזיס התאים חושף את האנטיגנים של הגידול, ומפעיל תגובה חיסונית כנגד תאי הגידול.

כדי להעמיס תאי גזע עצביים אנושיים בנגיף אונקוליטי, הדביקו את תאי הגזע ב-50 שכפול מותנה של חלקיקים נגיפיים של אדנו-וירוס לכל תא על פי פרוטוקולי טרנספקציה סטנדרטיים של אדנו-וירוס למשך שעתיים בטמפרטורת החדר עם הקשה תקופתית. לאחר מכן, שטפו את התאים שלוש פעמים במדיום טרי כדי להסיר חלקיקים נגיפיים לא קשורים ולהשעות את התאים במי מלח סטריליים לאספקה תוך-אף.

לאחר שהתאים שונו בהתאם לניסוי, הניחו את בעלי החיים נושאי הגידול המורדמים במצב שכיבה על וילון נקי מעל כרית חום והניחו כרית מרופדת מתחת לראשים כדי לשמור על הנחיריים בזווית זקופה. חומר הכרית צריך להיות פלסטיק הניתן לניגוב אלכוהול או מגבות נייר מגולגלות חד פעמיות כדי למנוע זיהום צולב של בעלי חיים.

כאשר העכברים נמצאים במקומם, השתמש במיקרופיפטה כדי להזרים 2 מיקרוליטר מאוכלוסיית תאי הגזע העצביים האנושיים המעניינים לכל נחיר של העכבר הראשון, ומאשר חזותית את שאיפת הטיפה לפני החלת נפח התאים הבא. חזור על המסירה לכל עכבר בתורו. לאחר מכן, המתן 5 דקות והחל את סבב התאים הבא. לאחר מתן כל ארבעת סבבי התאים, הניחו את בעלי החיים בתא התאוששות עם ניטור עד להחלמה מלאה.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.