השראת גליובלסטומה באמצעות טרנספוזיציה בתיווך SB: טכניקה ליצירת מודל עכבר חדשני באמצעות שילוב מתווך טרנספוזון של פלסמיד SB במוח עכבר יילודים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:11 דק׳ • July 8th, 2025
התחל בלקיחת צינור המכיל תערובת של פלסמידים. היפהפייה הנרדמת או פלסמיד טרנספוזון SB מהונדס לשאת אלמנט הניתן להעברה המורכב מאונקוגן הגורם לגליובלסטומה שמקורו באדם הדחוק בין שני רצפים חוזרים הפוכים. בנוסף, תערובת זו מכילה פלסמיד SB transposase בעל אלמנט המבטא אנזים טרנספוזאז.
כעת, הוסף מגיב טרנספקציה מתאים לצינור. שאפו את תערובת ההזרקה למזרק המצויד במיקרו-מחט. לאחר מכן, אבטח גור עכבר מורדם במצב שכיבה על מסגרת סטריאוטקסית. דמיין את אזור הראש של הגור כדי לאתר את תפרי הגולגולת. מקם את המיקרו-מחט מעל תפרי הגולגולת.
הזרקו את התערובת לחדר הצדדי - חלל בתוך פרנכימת המוח. לאחר מכן, התמיסה מתפזרת לפרנכימה של המוח, שם מולקולות ריאגנט הטרנספקציה מקלות על כניסת פלסמידים לתאים. ברגע שנכנס לתא, הפלסמיד הטרנספוזאז מבטא את מולקולות האנזים טרנספוזאז, המזהות את רצפי החזרה ההפוכים ומוציאות את אלמנט הטרנספוזון.
לאחר מכן, היסוד הניתן להעברה DNA משלב את עצמו מחדש באזור החזרה TA של ה-DNA הגנומי של הגור. טרנספוזיציה גנטית מביאה לטרנספורמציה אונקוגנית של תאי מוח, מה שמוביל להתפתחות גליובלסטומה במוח העכבר.
3 עד 4 שבועות לפני הניסוי, הקימו כלוב רבייה של עכברים עם זכר אחד ונקבה אחת. שלבו איגלו פלסטיק צבעוני להעשרת הסביבה ולהגדלת סיכויי ההזדווגות. הסר את הזכר לאחר אישור ההריון, ו-18 יום לאחר יום ההזדווגות, התחל לע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים