בידוד כלי דם במוח של עכבר: פרוטוקול לבידוד כלי דם שלמים מדגימת מוח מורין
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:20 דק׳ • July 8th, 2025
כלי המוח מוקפים בשכבה של תאי אנדותל המחוברים היטב. לתאים אלה יש קרום בסיס סביבם יחד עם רכיבים תאיים כמו פריציטים ואסטרוציטים.
כדי לבודד כלי מוח מתאי עצב ותאי גליה שמסביב, קחו המכילה מוח עכבר שקוע במאגר הומוגניזציה. טוחנים אותו לחתיכות קטנות. הומוגניזציה של רקמת המוח כדי לנתק אותה, לשחרר נוירונים, תאי גליה וכלי מוח. טיפול זה גם משבש את מעטפת המיאלין המקיפה את הנוירונים.
העבירו את ההומוגנאט לצינור ולצנטריפוגה כדי לגלול את הכלים. הרכיבים הקלים יותר כמו נוירונים ותאי גליה נשארים בסופרנטנט בעוד שהמיאלין יוצר שכבת ממשק צפופה המקיפה את הגלולה.
השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את כדור הכלי עם שכבת המיאלין המצורפת בתווך שיפוע צפיפות מתאים. צנטריפוגה כדי לגלול את כלי הדם ולקבל רצועה של מיאלין עשיר בשומן שצפה בחלק העליון של הסופרנטנט. הסר את רצועת המיאלין יחד עם מדיה משומשת והשהה מחדש את הכדור במאגר חדש.
מסננים את הכנת הכלי הגולמי באמצעות מכלול מסנן המכיל מסנן קטן מספיק כדי שהכלים לא יוכלו לעבור דרכו. העבירו את המסנן לכוס טרייה המכילה תמיסת חיץ. מגרדים בעדינות את נייר הסינון כדי לנתק את הכלים ולאחסן אותם להמשך ניתוח.
השתמש באזמל כדי לחתוך את העור מצוואר העכבר ועד האף ולמשוך את העור לאחור. שטפו את הגולגולת עם PBS כדי להסיר שערות מזהמות ולאחר מכן הכניסו זוג מספריים לגולגולת, קדמית לנורות הריח. פת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים