בדיקת פגוציטוזה חוץ גופית: שיטה מבוססת הדמיה חיה לחקר פנפטוזיס סינפטוזום בתיווך אסטרוציטים בזמן אמת

סינפטוזומים הם שברים עצביים מבודדים העשירים בשלפוחיות סינפטיות. סינפטוזומים אלה נבלעים על ידי אסטרוציטים - אוכלוסייה של תאים חיסוניים במוח - בתהליך המכונה פגוציטוזיס.

כדי לחקור פגוציטוזיס בתיווך אסטרוציטים במבחנה, התחילו בלקיחת לוחית תרבית המכילה שכבה אחת של אסטרוציטים. כעת, הוסף לצלחת מתלה סינפטוזום מצומד מחוון pH. לצבע אינדיקטור זה יש את המאפיין להאיר אך ורק ב-pH נמוך. דגרו את הצלחת למשך הזמן הרצוי.

במהלך הדגירה, פוספטידילסרין או PS הנמצאים על הממברנה החיצונית של הסינפטוזום מאפשרים לו להיקשר לקולטני ה-PS המתאימים על קרום האסטרוציטים. זה מקל על התיישבות הסינפטוזומים בבסיס. שאפו את המדיה המושקעת יחד עם סינפטוזומים לא קשורים מהצלחת.

לאחר מכן, השלם את הצלחת עם גורמים מקדמי פגוציטוזיס ודגירה. לאחר מכן, צלם את הצלחת באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. כאשר הם נקשרים לפני השטח, אסטרוציטים בולעים את הסינפטוזומים וגורמים להם להיכנס לפאגוזומים. ברגע שנכנסים לפאגוזומים, ה-pH הנמוך גורם למולקולות הצבע של האינדיקטור להאיר בבהירות.

הדמיה בזמן אמת חושפת את נוכחותם של כתמים פלואורסצנטיים בהירים המתאימים לסינפטוזומים מצומדים של אינדיקטור ה-pH הנבלעים על ידי האסטרוציטים. בסופו של דבר, כתמים אלה נעלמים, מה שמעיד על פירוק מוצלח של סינפטוזומים.

להדמיה חיה של בליעת הסינפטוזום, ראשית, הסר את הסופרנטנט מכל ב