Ex vivo electroporation of Chick Embryo Cerebellar Slices: שיטה להחדרת DNA פלסמיד המקודד חלבון פלואורסצנטי ירוק כדי לדמיין התפתחות תאים גרגיריים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:21 דק׳ • July 8th, 2025
תאי גרגיר המוח הקטן הם סוג הנוירונים הנפוץ ביותר במוח. השכבה הגרגירית החיצונית, EGL, מורכבת אך ורק ממבשרי תאים גרגיריים, GCPs, המתמיינים ונודדים פנימה ליצירת השכבה הגרגירית הפנימית, IGL.
כדי לדמיין את התפתחות התאים הגרגירים, הכינו תא אלקטרופורציה על ידי הצמדת אנודה לבסיס צלחת פטרי. הוסף מדיום תרבית לכיסוי האלקטרודה. כעת, הנח תוספת תרבית על האלקטרודה המכוסה בינונית. העבירו את פרוסות המוח הקטן של עובר הגוזל לתוספת התרבות בכיוון סגיטלי.
המישור הסגיטלי מאפשר לזהות את שכבת המטרה-EGL כנגד שכבות שונות של המוח הקטן. הוסף תמיסת צבע צמיגה המכילה DNA פלסמיד GFP מעל EGL. ה-DNA של הפלסמיד GFP מקודד לחלבון פלואורסצנטי ירוק המתפזר בצורה הומוגנית בתוך ציטופלזמת התא ומאפשר הדמיה של תאים חיים.
לאחר מכן, הנח קתודה בתווך ליד EGL אך לא ישירות על הרקמה. לאחר מכן, החל פולסים חשמליים מרובים על אזורי EGL שונים. הפולסים החשמליים גורמים לנקבוביות זמניות בקרום התא, ומאפשרים לתאים לקחת את ה-DNA של הפלסמיד. לאחר מכן, DNA פלסמיד מאפשר ביטוי GFP בתאים גרגירים.
דמיין את פרוסות המוח הקטן תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לצפות בהתמיינות תאים גרגירים ודפוס נדידה על פני שלבים שונים של התפתחות התא.
בנה תא אלקטרופורציה על ידי קיבוע האנודה של אלקטרופורטור לבסיס צלחת פטרי בגודל 60 מילימטר באמצעות סרט בידוד. הוסף כ -1 מיליליט
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים