אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:43 דק׳ • July 8th, 2025
התחל באלקטרופורציה על ידי נטילת פיפטת זכוכית המכילה את תמיסת הפלסמיד הרצויה. חבר אותו למחזיק מיקרופיפטה המצויד באלקטרודת חוט כסף, וודא שהאלקטרודה מוכנסת למיקרופיפטה. קח תא אלקטרופורציה המכיל קטע היפוקמפוס דק במיוחד שקוע בנוזל מוחי מלאכותי.
טבלו את האלקטרודה הקרקעית בנוזל הקיים בתא לצורך אלקטרופורציה לאחר מכן. הורד את קצה הפיפטה לתוך תא האלקטרופורציה ורשום את ההתנגדות הבסיסית. השתמש במיקרוסקופ כדי למקם את קצה הפיפטה ליד תא המטרה. ברגע שהפיפטה נמצאת במגע עם הממברנה העצבית, ההתנגדות שלה עולה בחדות.
הפעל לחץ אוויר חיובי כדי ליצור פלישה קטנה בקרום העצבי. הפעל במהירות שאיבה עדינה כדי לדחוף את הממברנה כלפי מעלה, וליצור אטימה רופפת בין קצה הפיפטה לממברנה. חזור על תהליך זה עוד כמה פעמים כדי לרכך את הממברנה ולהימנע מליזיס תאים.
לאחר המיזוג, יש למרוח יניקה חזקה ליצירת אטימה הדוקה עם קרום הנקרא אטם ג'יגהום. השתמש בפולסים חשמליים כדי ליצור נקבוביות חולפות באזור האטום של הממברנה. פתחים אלה מקלים על כניסת פלסמידים לתוך הנוירון הממוקד. לאחר אלקטרופורציה, הנקבוביות נאטמות מחדש, ולוכדות פלסמידים בתוך הנוירון.
להכנת תרביות פרוסות לאלקטרופורציה, העבירו את תוספות התרבות המעניינות לצלחות פטרי בודדות בגודל 3 סנטימטר עמוסות ב-900 מיקרוליטר של מדיום תרבית והניחו את התרביות בחממת פחמן דו חמצני על השולחן. לא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים