בידוד נוירונים בחוט השדרה: הליך שיפוע צפיפות לבידוד נוירונים בעמוד השדרה בילודים למחקרי מבחנה

כדי לבודד תאי עצב בחוט השדרה, קחו עמוד שדרה של עכבר שזה עתה נולד והניחו אותו על צלחת פטרי. שטפו את עמוד השדרה עם מאגר מלח כדי לשחרר את חוט השדרה. להעביר את חוט השדרה למדיום עצבי קר כדי לקדם את הישרדות התאים.

לאחר מכן, טחנו את חוט השדרה והעבירו את השברים לצינור המכיל מדיום עצבי טרי. דגרו את הצינור באמבט מים שייקר לצורך התאקלמות. לאחר הדגירה, הסר את המדיום המושקע והוסף את מדיום העיכול. אנזימי עיכול מבקעים את מטריצת הרקמה כדי לשחרר את התאים.

בצע טריטורציה על ידי שאיבת שברי הרקמה לתוך הפיפטה ורוקן במהירות את הרכיבים, תוך שחרור תאים בודדים לתרחיף. לאחר מכן, העבירו את המתלה הזה לצינור המכיל מדיום שיפוע צפיפות וצנטריפוגה.

לאחר הצנטריפוגה, השכבה השטחית של הצינור מכילה פסולת רקמות. השכבה הראשונה כוללת אוליגודנדרוציטים ואסטרוציטים. השכבה השנייה והשלישית מורכבות מנוירונים, כאשר השכבה השלישית היא בעלת הטוהר הגבוה ביותר. לבסוף, הגלולה מכילה תאי מיקרוגליה.

אוספים את השכבה השלישית לצינור טרי ומוסיפים מדיום עצבי כדי לדלל את מדיום שיפוע הצפיפות. צנטריפוגה לגלולה של הנוירונים. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה בתווך נוירו-בסיסי כדי לשמר את הנוירונים לניסויים נוספים.

כדי להתחיל בהליך זה, הפרד את הראש מגופם של גורי העכברים שהורדמו באמצעות מספריים. לאחר מכן, ייצב את הזנב והזרועות על שולחן ההליכי