Decellularization קומפלקס לב ריאה: טכניקה עבור decellularizing הלב והריאות מ מודל Murine

דה-סלולריזציה מרוקנת איברים ממרכיביהם התאיים ומשאירה את מבנה ה-ECM שלם. זה עוזר בשימור הארכיטקטורה התלת מימדית של איברים. לצורך הליך הדה-סלולריזציה, הנח עכבר שעבר המתת חסד במצב שכיבה. נתח את העכבר וחשוף את קומפלקס הלב ריאה.

קשרו את כל כלי הדם העיקריים שמקורם בלב למעט אבי העורקים וכלי הדם העיקריים של מחזור הדם הריאתי. שלב זה מונע דליפת נוזלים במהלך הליך הזילוף שלאחר מכן. צור פתח בקנה הנשימה והכניס קטטר דרך פתח זה. צנתרו את אבי העורקים היורד מלמטה עד שהקטטר מגיע לקשת אבי העורקים.

תפרו את הצנתרים כדי לאבטח את מיקומם ולחבר אותם למשאבת הזילוף. התחל זלוף במים נטולי יונים. זלוף דרך אבי העורקים מאפשר הסרה יעילה של דם מכל כלי הדם הלבביים. בסופו של דבר, המים נכנסים לעורק הריאה המוביל לריאות.

לאחר הוצאת דם לחלוטין מכלי הדם של הריאות, הפסק את זלוף המים והחלף אותו בתמיסות ניקוי שונות הנעות בין עדין לחזק. הליך זה משחרר תאים ומשחרר את הרכיבים התוך-תאיים, מה שגורם ללב ולריאות להיראות שקופים.

החדרו שוב במים נטולי יונים כדי להסיר את כל מולקולות הניקוי שנותרו. אחסן קומפלקס לב ריאה נטול תאים בתמיסה המכילה אנטיביוטיקה, מה שמבטיח חיי מדף ארוכים.

התחל בגילוח בית החזה, הבטן והגב של העכבר המורדם עם קוצץ השיער. חיטוי האזור עם 70% אתנול. לאחר מכן, הצמד את העכבר למגש פוליסטירן, והאריך את גפיו הקדמיות והאחוריות, כמו גם את ראשו וזנבו. הנח אותו מתחת למיקרוסקופ המיקרו-כירורגי.

בעזרת מספריים בדוגמה ישרה של מאיו, בצע חתך עורי העובר מהאזור התת-לסת לבטן התחתונה ונתח תת עורית כדי לחשוף את דופן בית החזה והצפק. לאחר מכן, השתמש במספריים מיקרו-כירורגיים כדי לחתוך את שרירי החזה הגדול והחזה הקטן לאורך החלל הבין-צלעי השישי משני צידי דופן בית החזה.

חותכים את עצם החזה לאורך החתכים הקודמים בעזרת מספריים בדוגמה ישרה. לאחר מכן, השלם סטרנוטומיה על ידי חיתוך עצם החזה לאורך צירו הארוך. הרם והצמד את שני צידי דופן בית החזה כדי לחשוף את קומפלקס הלב-ריאה. השתמש במיקרו-מלקחיים עגולים כדי לכרות את בלוטת התימוס ורקמת השומן שמסביב על ידי משיכתם בעדינות מהחיבורים שלהם וחתוך את הוושט בעזרת מספריים זעירים.

הפרד את הוורידים הברכיוצפליים והעורק הברכיוצפלי בעזרת מיקרו-מלקחיים חדים. לאחר מכן, הפרד את העורקים הצוואר המשותף השמאלי והעורקים התת-בריחיים השמאליים מהרקמה הבסיסית כדי להקל על קשירה וצריבה. השתמש במחזיק מיקרו-מחט ובמיקרו-מלקחיים חדים ותפר 9-0 כדי למקם תפרים מעל הופעת העורקים התת-בריחיים השמאליים והצווארים התת-בריחיים השמאליים. צרבו את הוורידים הברכיוצפליים.

בעזרת מיקרו-מספריים, פתח כניסה על ידי חיתוך הרצועה. הכניסו קטטר בגודל 27 לקנה הנשימה ודחפו בעדינות עד שקנה הנשימה מסתעף לתוך הסמפונות, תוך הקפדה לא לשבש את הסמפונות. בעזרת תפר 6-0, הנח שלושה תפרים סביב קנה הנשימה כדי לאבטח את הקטטר.

חתך את העכבר בגובה חוליית בית החזה ה -12. אבי העורקים היורד עובר מלפנים לעמוד השדרה ויש לחתוך אותו כאן יחד עם עמוד השדרה. צנתר לאחור את אבי העורקים ודחף את הקטטר עד שהוא מגיע לקשת אבי העורקים. בעזרת תפר, הנח ארבעה תפרים סביב אבי העורקים החל מ-5 מילימטרים מתחת לקצה הצנתר.

חבר את העכבר למערכת משאבה באמצעות צינורות סיליקון ומחברים תחתונים. החדרה עם מים נטולי יונים ב -200 מיקרוליטר לדקה למשך 15 דקות. לאחר מכן, החלף את חומר הזלוף ל-0.5% DOC מדולל במים נטולי יונים והחדיר למשך הלילה. למחרת, החלף את חומר הזלוף ל-0.1% SDS מדולל במים נטולי יונים והחדיר למשך 8 שעות. לאחר מכן, יש לשטוף במים נטולי יונים למשך 24 שעות כדי לשטוף את ה-SDS וה-DOC.

כרתו את הלב והריאות המנוטרלים על ידי חיתוך חיבוריו לבית החזה. אחסן את הרקמה בצינור קריוטוב סטרילי במים נטולי יונים עם 1% פניצילין-סטרפטומיצין ו-0.3 אזיד נתרן מיקרו-מולרי ב-4 מעלות צלזיוס.