JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 3:38 דק' • July 8th, 2025
פני השטח הגביים של לשון העכבר מכוסים בשלושה סוגים עיקריים של בליטות מוגבהות הנקראות פפילות, כלומר פפילות פטרייתיות, מעגליות ופיליפורמיות. הפפילות העגולות, או CVP, המורכבות מתעלות אפיתל המאכלסות את בלוטות הטעם, נתמכות על ידי שכבה של רקמת חיבור - הלמינה פרופריה.
כדי לבודד את אפיתל ה-CVP, התחל עם עכבר שעבר המתת חסד במצב שכיבה. לאחר מכן, חתכו את הלחיים ונתחו את רצועת הרקמה העבה - הפרנולום הלשוני - כדי להפריד את הלשון מרצפת חלל הפה. מעבירים את הלשון הכרותה לכלי המכיל מאגר צונן.
לאחר מכן, גזרו את החלק הקדמי של הלשון. הזריק בזהירות קוקטייל עיכול המכיל אנזימי דיספאז וקולגנאז לחלל התת-אפיתל של אזור ה-CVP, בין האפיתל לרקמות הבסיסיות. משוך את המחט תוך כדי הזרקת המתלה לאזור.
דגרו על הלשון למשך הזמן המתאים. דיספזות וקולגנאזות מעכלות את חלבוני המטריצה החוץ-תאית בתוך רקמת החיבור, מה שמקל על הפרדת אפיתל CVP מהרקמה. לאחר הדגירה, בצע חתכים באפיתל באזור CVP.
הפרד בעדינות את האפיתל המשוחרר מהרקמה הבסיסית. לבסוף, העבירו את אפיתל ה-CVP המופרד לצינור מצופה חלבון כדי למנוע מהרקמה להידבק לדופן הצינור. ניתן לאחסן את אפיתל ה-CVP להמשך עיבוד במורד הזרם.
לאחר המתת חסד של עכבר מבוגר, השתמש במספריים סטריליים גדולים כדי לחתוך את הלחיים ולשבור את הלסת. לאחר מכן, הרם את הלשון וחתוך את הפרנולום הלשוני כדי להפריד את הלשון מרצפת חלל הפה. חותכים את הלשון ואוספים אותה ב-dPBS סטרילי קר כקרח עם סידן ומגנזיום.
תחת מיקרוסקופ מנתח, הסר והשליך את הלשון הקדמית על ידי חיתוך רק חלק קדמי של הבולטות הבין-טוחנת בעזרת סכין גילוח. לאחר מכן, השתמשו במגבון עדין כדי להסיר שיער ועודפי נוזלים מהלשון האחורית.
לאחר מכן, מלאו מזרק של 1 מיליליטר ב-200 עד 300 מיקרוליטר של תמיסת אנזים הזרקה והכניסו מחט בגודל 30 אינץ' ממש מעל הבולטות הבין-טוחנת עד לחלק הפנימי של הפפילות ההיקפית או CVP. הזריק את תמיסת האנזים מתחת ובקצוות הצדדיים של ה-CVP בין האפיתל לרקמות הבסיסיות. משוך את המזרק לאט וברציפות מהלשון בזמן הזרקת התמיסה.
דגרו את הלשון ב-dPBS סטרילי נטול סידן/מגנזיום בטמפרטורת החדר למשך 33 דקות בדיוק. בעזרת מספריים לדיסקציה עדינה במיוחד, בצע חתכים קטנים באפיתל באופן דו-צדדי ורק לפני ה- CVP. לאחר מכן, מקלפים בעדינות את האפיתל על ידי הרמתו בעזרת מלקחיים עדינים. לאחר שאפיתל התעלה נקי מרקמת החיבור הבסיסית, הנח אותו בצינור מיקרו-צנטריפוגה של 2 מיליליטר המצופה מראש ב-FBS.