בידוד חיידקי לחמית מבוסס ספוגית: טכניקה לבידוד חיידקים קומנסליים ממודל הלחמית של מורין

הלחמית של העין מכילה חיידקים קומנסליים. המיקרופלורה המקומית הזו מגנה על העין מפני זיהומים על-ידי הפעלת תאי מערכת החיסון כדי לתקוף חיידקים מזיקים שנכנסים לרירית העין.

כדי לבודד חיידקים קומנסליים, הנח עכבר מורדם במצב רוחבי. קח ספוגית עיניים סטרילית טבולה במדיום מתאים. הכנס את קצה הספוגית הרטובה לאזור הלחמית המדיאלית של עין שמאל. לחץ על גלגל העין והזיז את המקלון קדימה ואחורה לאורך הלחמית כדי לאסוף אוכלוסייה קומנסלית מגוונת.

הסר את הספוגית וערבב אותה לתוך צינור המכיל מצע העשרה מיקרוביאלי. שלב זה משחרר את החיידקים הלכודים מרשת הכותנה של הספוגית לתוך המדיה. השליכו את הספוגית ודגרו את הצינור כדי להקל על תחילת צמיחת החיידקים.

יש להוציא כמה טיפות מחומר מועשר מחוסן, על צלחת אגר דם בתבנית הרצויה ולדגור על העיניים. פפטוני הקזאין והסויה הקיימים במדיה מספקים חנקן הדרוש לסינתזה של פפטידים בעוד שהנתרן הכלורי שומר על שיווי משקל אוסמוטי.

לחיידקים קומנסליים יש אנזימי המוליזין המעכלים את ההמוגלובין הקיים בתקשורת הדם. זה מייצר דפוס אופייני על צלחת האגר, וגורם לחיידקים שונים להתרבות למושבות נפרדות מבחינה מורפולוגית. ספרו את מספר המושבות כדי לקבוע את השפע היחסי שלהן בלחמית.

ודא שהעכבר מורדם כראוי על ידי לחיצה על כרית כף הרגל האחורית. המשך רק אם אין תנועה. הקצה יד אחת לטיפול בעכברים מורדמים והיד השנייה לטפל במקלון העין ובתרבות. הוציאו את העכבר מהכלוב והניחו אותו על גבי משטח העבודה הממוקם על צדו כשעין שמאל חשופה. מרססים ידיים עטויות כפפות באיזופרופנול ומייבשים אותן במגבת נייר.

שחרר את המכסה של צינור מיקרו-צנטריפוגה BHI עם התווית עם היד הייעודית לטיפול במדיה והנח את הצינור בחזרה בארון התקשורת. טבלו את קצה הכותנה של ספוגית העין ב-BHI. לאחר מכן, משוך את הספוגית מהצינור תוך כדי סיבוב הקצה פעמיים כנגד הצינור הפנימי כדי להסיר עודפי נוזלים ולהסיר אותו.

בעזרת היד המטפלת בעכבר, החזק בעדינות את העכבר בצוואר. ביד השנייה, הנח את קצה ספוגית העין כנגד אזור הלחמית המדיאלי של העין השמאלית. יש ללחוץ קלות על גלגל העין ולהזיז את המקלון בתנועת שטיפת חלון בין העפעף התחתון לעין 10 פעמים, תוך שמירה על לחץ קבוע. מבלי לגעת בפרווה, הסר בעדינות את קצה הספוגית בניצב למקום בו הוכנסה. הנח את צד הכותנה של הספוגית כלפי מטה ישירות לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה מסומן עם מדיה BHI.

יש למרוח טיפת עיניים על העין המנוקבת. אם תרצה, רכוש ספוגיות עור או פרווה לדגימות בקרה, עיקור כפפות כראוי בין כל ספוגית. בסיום, החזר את העכבר לכלוב. תן לספוגית לעמוד 10 עד 15 דקות על קרח. לאחר מכן, יש לעקר ידיים עטויות כפפות ולהסיר את הספוגית תוך ערבוב הקצה במדיה למשך 10 סיבובים. משוך את הספוגית על ידי סיבוב הקצה כנגד הדופן הפנימית של הצינור למשך חמישה סיבובים והשליך אותו למיכל ביולוגי. חזור על התהליך עבור כל עכבר.

העשירו את הדגימה על ידי דגירה סטטית של הצינורות למשך שעה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. במהלך הדגירה, סמן צלחת TSA אחת בטמפרטורת החדר לכל ספוגית עין עכבר או ספוגית בקרה וחלקו אותה לשניים. מוציאים את הדגימות המועשרות מהחממה ומניחים אותן על קרח. מערבב בקצרה את הדגימות כדי לערבב. לאחר מכן, יש לשים 10 מיקרוליטר מהדגימה על צלחת ה-TSA ולהטות את הצלחת ליצירת רצועה. חזור על זה פעמיים.

בצד השני של קו ההפרדה של הצלחת, צור 10 נקודות עם 10 מיקרוליטר דגימה כל אחת. דגרו את הצלחות בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות, יומיים ו -4 ימים בתא נקי המונע התייבשות של צלחות אגר. ספרו את המושבות ברצועות. שימו לב למורפולוגיה וחישבו יחידות יוצרות מושבה לכל ספוגית עבור מבודדים דומים מבחינה מורפולוגית.