מתקן הדמיה נתמך בימוי כבד עכבר להדמיית כלי דם מבוססת מיקרוסקופ מולטיפוטון: טכניקת הדמיה בסיוע מכשיר ייצוב לקבלת תמונות רב-ממדיות של כלי דם בכבד עכבר

מיקרוסקופיה מולטיפוטונית מאפשרת ללכוד תמונות תלת מימדיות ברזולוציה גבוהה של כלי הדם המסומנים בפלואורסצנט בתוך הרקמה החיה. התחל עם עכבר מורדם במצב שכיבה.

הזריק בזהירות תרחיף של פלואורופור מצומד-דקסטרן לווריד הזנב שלו. המולקולות המוזרקות זורמות במחזור הדם ומגיעות לאיברים כמו הכבד. הצבע הפלואורסצנטי מסמן את סרום כלי הדם, ומסייע להדמיה של כלי הדם, בעוד שהדקסטרן בעל המשקל המולקולרי הגבוה המחובר מונע את דליפתם מכלי הדם.

הכן את אזור הבטן של העכבר. העבר אותו לבסיס מסגרת הדמיית האיברים המצוידת בטבעת יניקה המכילה עדשת הדמיה המחוברת למשאבת ואקום. חתך לאורך גבול החזה התחתון שלו כדי לחשוף את הכבד.

הנחיית טבעת היניקה לכבד, הפעלת ואקום או לחץ שלילי המאפשר את ספיחת הכבד לעדשה בטבעת היניקה. שלב זה מפחית את חפצי התנועה במהלך ההדמיה. העבר את מסגרת ההדמיה המכילה עכבר לשלב מיקרוסקופ סריקת הלייזר הרב-פוטוני.

כסו את העדשה במי מלח המשמשים כמדיום טבילה להדמיה ברזולוציה גבוהה. במהלך ההדמיה, הפוטונים הממוקדים באורך גל ארוך בעלי אנרגיה נמוכה יותר מאפשרים חדירה עמוקה יותר לרקמות ומעוררים פלואורופורים בכלי הדם בנקודת המוקד, וגורמים לפליטה וזיהוי של אותות פלואורסצנטיים.

סדרה של סריקות מהחתכים האופטיים שנבחרו בעומקים שונים משחזרת תמונה תלת מימדית מלאה של כלי הדם בתוך הרקמה.

לאחר אישור היעדר רפלקס יישור בעכבר C57BL/6 זכר מורדם בן 8 שבועות, נגב את זנב העכבר ב-75% אלכוהול והשתמש במזרק של 1 מיקרוליטר המצויד במחט בגודל 30 כדי להזריק 10 מיליגרם למיליליטר של רודמין B איזותיוציאנט-דקסטרן טרי שהוכן ב-100 מיקרוליטר של רודמין B איזותיוציאנט-דקסטרן לווריד הזנב.

לאחר שכל התמיסה סופקה, השתמשו בצמר גפן כדי להפעיל לחץ על מקום הניקוב והשתמשו בגזה רטובה במים סטריליים כדי להשרות את פרוות הבטן. השתמשו בסכין גילוח כדי לגלח את הבטן, תוך ביצוע משיכות לכיוון הפרווה, והניחו את העכבר על כרית חימום מחוטאת באלכוהול בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.

כדי לתקן את כבד העכבר עם מסגרת הדמיה של איברי גוף, ראשית, הנח יניקה נקייה בקוטר 5 מילימטר במצב קבוע ונגב את כרית החימום וכוס היניקה ב-75% אלכוהול. חבר את היניקה לצינור משאבת הוואקום והפעל את המשאבה.

על שולחן מעוקר אלכוהול של 75%, השתמש במספריים כירורגיים כדי לחתוך 2 סנטימטרים של עור מגבול החזה התחתון של העכבר ולחשוף את הכבד. הנח את העכבר ואת כרית החימום על בסיס המחזיק של מסגרת הגוף והתאם את מתקן הדמיית האיברים כך שכוס היניקה תוכל להחזיק את הכבד. לאחר מכן, השתמשי בלחץ שלילי של 30 עד 35 קילופסקל ליניקה כך שהכבד יתחבר לכוס.

כדי להגדיר את מיקרוסקופ סריקת הלייזר הרב-פוטוני, הפעל את המיקרוסקופ ובחר את המטרה פי 60. תקן את המסגרת והעכבר מתחת למטרה והוסף טיפה של מי מלח רגילים לכוס גדולה מספיק כדי לכסות את העדשה. התאם את המטרה כך שהעדשה פשוט תיגע במי המלח הרגילים והפעל את תוכנת הלייזר.