בידוד תאי אינטרסטיציאל של שסתום עכבר: שיטה אנזימטית לבידוד ותרבית VICs ממסתם אבי העורקים של העכבר

המסתם האאורטלי של הלב הוא מבנה תלת-עלוני המורכב מתאי הביניים של המסתם הפנימי או VICs המפוזרים ברחבי המטריצה החוץ-תאית הצפופה ותאי האנדותל של המסתם שמעליו.

כדי לבודד VICs, ראשית, הכינו עכבר שעבר המתת חסד במצב שכיבה. דרך חתך בטן וחזה בקו האמצע, חשוף את הלב. עשו חתך קטן בין הפרוזדור השמאלי לחדר ואחריו זלוף מי מלח כדי לנקז את הדם. חתכו את אבי העורקים העולה בגובה קשת אבי העורקים וקצרו את הלב.

יש לחצות ולהשליך את שני השלישים הדיסטליים של החדרים לפני שתנתח לאורך את החלק הנותר של הלב כדי לחשוף את עלוני המסתם האאורטלי 'בצורת U'. כורתים את העלונים ושוטפים עם חוצץ צונן כדי להסיר דם.

לאחר מכן, טפלו בעלונים בתמיסת קולגנאז מרוכזת נמוכה ודגרו. בריכוזים נמוכים, קולגנאז - אנזים פרוטאוליטי - מפרק רק חלקית את המטריצה החוץ-תאית, ומעביר VECs פני השטח מהעלים.

צנטריפוגה והחלף את הסופרנטנט המכיל אנזים במאגר, והעביר את הכדור המרחף לצלחת פטרי. אוספים את העלונים ומטפלים בהם בתמיסת קולגנאז מרוכזת גבוהה לעיכול שני. עם הדגירה, קולגנאז מפרק עוד יותר את המטריצה החוץ-תאית, ומשחרר VICs לתמיסה.

צנטריפוגה לכדור ה-VICs ולהשעיה מחדש במדיה מתאימה. לבסוף, זרעו נפח נמוך של תרחיף התאים על צלחת מרובת בארות כדי להקל על היצמדות ה-VICs לתחתית הבאר. דגירה כדי לאפשר ל-VICs להתרבות.

לפני תחילת הניסוי, יש לנקות ולעקר את כל המכשירי