אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:40 דק׳ • July 8th, 2025
הדמיה תוך-חיונית כוללת הדמיה של תאים של בעל חיים חי דרך חלון הדמיה המושתל בבעל החיים. היא מאפשרת התבוננות ארוכת טווח בדינמיקה התאית מבלי לפגוע בתפקודיה.
כדי להתחיל, קח עכבר טרנסגני מורדם שהושתל בעבר עם חלון הדמיה של הלבלב הנתמך על לוחית מתכת. לוחית הבסיס מפרידה מרחבית בין הלבלב למעי, ובכך מפחיתה את חפצי התנועה מתנועות פיזיולוגיות כגון פריסטלטיקה.
העכבר הטרנסגני מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק או GFP תחת מקדם גן אינסולין המתבטא בתאי בטא של איים בלבלב.
לאחר מכן, החזק את זנב העכבר בחוזקה ורסס חומר חיטוי כדי להסיר מזהמים על פני השטח. הכנס קטטר לווריד הזנב הרוחבי. הזריק תמיסה המכילה נוגדנים המסומנים בבדיקה פלואורסצנטית אדומה לווריד הזנב. נוגדנים אלה נקשרים לתאים המצפים את כלי הדם, וצובעים אותם באדום.
כעת, העבר את העכבר להגדרת מיקרוסקופיה תוך-חיונית. הכנס את חלון הדמיית הלבלב למחזיק החלון. התחל לצלם בהגדלה נמוכה כדי לאתר אשכולות איים פלואורסצנטיים ירוקים המוקפים בכלי דם פלואורסצנטיים אדומים. הגדל את ההגדלה כדי לקבל הדמיה איכותית ברמה התאית של תאי בטא בודדים.
התחל בהפעלת המיקרוסקופ התוך-חיוני, כולל כוח הלייזר. כדי להכניס קטטר כלי דם, הפעל לחץ על הצד הפרוקסימלי של הזנב עם האצבע המורה והאצבע השלישית. במידת הצורך, מחממים את הזנב בעזרת מנורה. חטאו את וריד הזנב עם תרסיס אתנול 70%, ולאחר מכן, הכניסו קטטר בגודל 30 לווריד הזנב הצדדי ודמיינו את החזרת הדם בצינור PE-10. מרחו סרט משי על הקטטר כדי לייצב אותו.
הזריק דקסטרן FITC ו-TMR דקסטרן, או בדיקות פלואורסצנטיות אחרות, לפי הצורך, בהתאם לשילוב של בדיקות פלואורסצנטיות. הכנס בדיקה רקטלית כדי לשלוט אוטומטית בטמפרטורת הגוף באמצעות מערכת כריות החימום ההותרמית. לאחר מכן, הכנס את חלון הדמיית הלבלב שהוכן במהלך הגדרת המיקרוסקופיה התוך-חיונית למחזיק החלון. העברת העכבר ממשטח הניתוח לשלב ההדמיה.
כדי לבצע הדמיה תוך-חיונית, התחל בהדמיה של הלבלב בהגדלה נמוכה, כגון פי ארבעה, כדי לסרוק את כל המראה של הלבלב בחלון הדמיית הלבלב. לאחר קביעת אזור העניין, עבור לעדשה אובייקטיבית בהגדלה גבוהה יותר, כמו פי 20 או פי 40, כדי לבצע הדמיה ברמת התא ברזולוציה רוחבית וצירית של כ-0.5 מיקרומטר ו-3 מיקרומטר, בהתאמה.
בצע הדמיית z-stack או זמן-lapse כדי לצפות במבנה התלת-ממדי או בדינמיקה ברמת התא, כגון נדידת תאים.